应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重组质粒单双酶切结果一样，奇怪了的……
161/1返回列表
查看: 2632  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Marado

金虫 (正式写手)

[交流] 重组质粒单双酶切结果一样，奇怪了的……

重组的表达质粒，上面只有一个BamH I与一个Not I，表达载体大小为将近5kb，目的片段700多点bp.
求解！序列是没有问题的，比对过了，没有突变.

酶切.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-12-06 10:29:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wccc

银虫 (小有名气)
★
Marado(金币+1): 谢谢参与
是不是酶有问题了？或者酶的buffer不对?换个酶切前后顺序试试吧……
赞一下 回复此楼
3楼2012-12-06 13:39:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

倾听世界0721

金虫 (小有名气)
★
Marado(金币+1): 谢谢参与
你确定只有一个BamHI酶切位点吗？这样看好像是有两个BamHI酶切位点，把你的序列放到WebCutter上看看试试，会不会漏掉了什么位点。
赞一下 回复此楼
4楼2012-12-06 13:45:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 倾听世界0721 at 2012-12-06 13:45:53
你确定只有一个BamHI酶切位点吗？这样看好像是有两个BamHI酶切位点，把你的序列放到WebCutter上看看试试，会不会漏掉了什么位点。

非常确定！
回复此楼
5楼2012-12-06 14:09:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

labbench

新虫 (小有名气)
★
Marado(金币+1): 谢谢参与
测序了再确定好不好！现在测序那么便宜~
赞一下 回复此楼
6楼2012-12-06 14:28:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

desheng101

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
Marado(金币+1): 谢谢参与
Marado: 金币+2 2012-12-06 16:23:20
按照楼主说得载体将近5000，目的700，你酶切条带倒是符合。单酶切和双酶切都一样是不是有一个酶没发挥作用？
赞一下 回复此楼
7楼2012-12-06 15:05:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hzlatqh

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
Marado(金币+1): 谢谢参与
Marado: 金币+2 2012-12-06 16:22:54
要是序列没错的话，那就是酶污染了？为什么不做一个NotI单酶切看看呢
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

Marado
8楼2012-12-06 15:50:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by hzlatqh at 2012-12-06 15:50:26
要是序列没错的话，那就是酶污染了？为什么不做一个NotI单酶切看看呢

果然酶污染了，换了一管，正常了
还是你回答的比较对头
赞一下 回复此楼
9楼2012-12-06 16:21:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhengli123

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我觉得可能是你的片段里有两个BamHI酶切位点，并且这两个位点的长度也大概在700bp左右
赞一下 回复此楼
10楼2012-12-07 09:40:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by zhengli123 at 2012-12-07 09:40:42
我觉得可能是你的片段里有两个BamHI酶切位点，并且这两个位点的长度也大概在700bp左右

是酶污染了………………两管酶被混了……
赞一下 回复此楼
11楼2012-12-07 09:58:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吉林农大

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by Marado at 2012-12-06 16:21:57
果然酶污染了，换了一管，正常了
还是你回答的比较对头...

想请问一下，请问你BamH I和Not I用的是哪个公司的，后来进行的是双酶切吗，酶切效果理想吗，如果理想的话，我想请教一下，您的酶切体系是怎么设定的，还有温度是多少，时间是多长，谢谢了，我也用这两个酶切，可是遇到问题了，用的是Takara的酶！
赞一下 回复此楼
12楼2013-04-04 10:58:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 吉林农大 at 2013-04-04 10:58:41
想请问一下，请问你BamH I和Not I用的是哪个公司的，后来进行的是双酶切吗，酶切效果理想吗，如果理想的话，我想请教一下，您的酶切体系是怎么设定的，还有温度是多少，时间是多长，谢谢了，我也用这两个酶切，可是 ...

我用的也是TAKARA的，酶切体系看是做验证还是做回收，一般做个20ul体系，酶都加0.5ul，质粒根据浓度加，温度37℃，一般4,5个小时就可以完全切开.
赞一下 回复此楼
13楼2013-04-07 08:59:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吉林农大

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
13楼: Originally posted by Marado at 2013-04-07 08:59:10
我用的也是TAKARA的，酶切体系看是做验证还是做回收，一般做个20ul体系，酶都加0.5ul，质粒根据浓度加，温度37℃，一般4,5个小时就可以完全切开....

嗯，我也是切了好几个小时，但出现过杂带切割不完整的现象，它们公司的NOT I好像不怎么活
赞一下 回复此楼
14楼2013-04-08 23:50:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 吉林农大 at 2013-04-08 23:50:52
嗯，我也是切了好几个小时，但出现过杂带切割不完整的现象，它们公司的NOT I好像不怎么活...

他们的NOT I有时候确实不太好用.
赞一下 回复此楼
15楼2013-04-09 10:40:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小芳同学1113

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
什么原因呢  我跟你一样的情况
赞一下 回复此楼
16楼2022-10-16 17:23:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
su-b082楼
2012-12-06 12:34   回复  
Marado(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 Marado 的主题更新
161/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭