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ltakashi

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[交流] 【求助/交流】帮我看一下质粒单双酶切图！已有18人参与

我的目的片段大小1800左右
连的是PMD-18T
第一张图是质粒提取图：

第二张图是单酶切图，用的是ECOR I

下面一张图是双酶切，用的是ECORI 和HIND III

帮我分析下，我的目的片段到底有没有可能连上去啊？

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1楼 2010-07-26 18:22:57

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ltakashi

银虫 (小有名气)

amisking:严禁纯表情发帖！ 2010-07-26 20:49:22

2楼2010-07-26 19:02:39

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黄大牛

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3楼2010-07-26 19:08:05

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ltakashi

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4楼2010-07-26 19:22:15

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花花贝

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双酶切不是应该切出你的片段吗？切出来跟marker比照一下

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5楼2010-07-26 20:07:58

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chemifunan

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lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-08-02 17:05:42

楼主同学首先要说一下跑质粒不用上marker 酶切以后跑的时候再上质粒和Marker不能比大小上了浪费了
你跑的胶条带倒是蛮好的

pMD18是T载体吧你是TaqPCR直接连的？那告诉我你的片段和PCR引物上各有什么酶切位点为何用EcoR和Hind切？

pMD18大概2k吧你的片段1.8 即使你引物上带E/H 切出来也不太好比可以再找个能区分的酶切位点切两个对照着看看

单酶切两条带双酶切却是一条带怎么回事？

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Bemühen Sie !

6楼2010-07-26 21:05:04

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ltakashi

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引用回帖:

Originally posted by chemifunan at 2010-07-26 21:05:04:
楼主同学首先要说一下跑质粒不用上marker 酶切以后跑的时候再上质粒和Marker不能比大小上了浪费了
你跑的胶条带倒是蛮好的

pMD18是T载体吧你是TaqPCR直接连的？那告诉我你的片段和PCR引物上各有什么酶切 ...

PMD-18是T载体，大小在2600左右，我的目的片段是PCR之后回收得到的，PCR中用的TAQ酶可以自动加上A的！
我的目的基因里面没有ECOR I 和HIND III位点，所以我用这两个酶！
另外，我没有在引物上设计酶切位点！！

至于你最后一个问题，我也不清楚！

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7楼2010-07-26 21:21:54

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