应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】帮我看一下质粒单双酶切图！
71/1返回列表
查看: 2447  |  回复: 29
查看全部回帖 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ltakashi

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】帮我看一下质粒单双酶切图！ 已有18人参与

我的目的片段大小1800左右
连的是PMD-18T
第一张图是质粒提取图：


第二张图是单酶切图，用的是ECOR I

下面一张图是双酶切，用的是ECORI 和HIND III


帮我分析下，我的目的片段到底有没有可能连上去啊？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-07-26 18:22:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ltakashi

银虫 (小有名气)
amisking:严禁纯表情发帖！ 2010-07-26 20:49:22
2楼2010-07-26 19:02:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ltakashi

银虫 (小有名气)
★
amisking(金币-1):严禁纯表情发帖！ 2010-07-26 20:49:29
4楼2010-07-26 19:22:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ltakashi

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by chemifunan at 2010-07-26 21:05:04:
楼主同学 首先要说一下 跑质粒不用上marker 酶切以后跑的时候再上 质粒和Marker不能比大小 上了浪费了
你跑的胶条带倒是蛮好的

pMD18是T载体吧 你是TaqPCR直接连的？ 那告诉我你的片段和PCR引物上各有什么酶切 ...

PMD-18是T载体，大小在2600左右，我的目的片段是PCR之后回收得到的，PCR中用的TAQ酶可以自动加上A的！
我的目的基因里面没有ECOR I 和HIND III位点，所以我用这两个酶！
另外，我没有在引物上设计酶切位点！！

至于你最后一个问题，我也不清楚！
赞一下 回复此楼
7楼2010-07-26 21:21:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ltakashi

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hubuzdw at 2010-07-26 22:16:54:

图很奇怪，EcoR-I 有星活性，用HindIII好切，明显你的EcoR-I 酶切不完全，没的比，另外你DNA模板回收干净了？为什么不每次上个PMD18T和模板质粒的对照，相同条件处理的？

单纯的大小比较似 ...

DNA回收后，做了验证，片段很单一无拖尾！
MARKER我用的DS 5000，
溴酚兰跑了大概有离胶底部1.5到2厘米之间。

另外你说的对照是怎么回事？
赞一下 回复此楼
10楼2010-07-27 10:42:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ltakashi

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by chemifunan at 2010-07-27 10:49:12:
我知道pMD18是T载体 引物和片断内部都没有 载体上有 切完了还是一条带那就是没切开或者没连上

最后我是问你图是不是放反了 你怎么单酶切比双酶切多一条带 第二张图倒像是切的对的

TAE快检一下就行 找一个没 ...

没有贴反
回复此楼
12楼2010-07-27 10:51:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ltakashi 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭