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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重组质粒单双酶切结果一样，奇怪了的……
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Marado

金虫 (正式写手)

[交流] 重组质粒单双酶切结果一样，奇怪了的……

重组的表达质粒，上面只有一个BamH I与一个Not I，表达载体大小为将近5kb，目的片段700多点bp.
求解！序列是没有问题的，比对过了，没有突变.

酶切.jpg
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1楼2012-12-06 10:29:07
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吉林农大

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
13楼: Originally posted by Marado at 2013-04-07 08:59:10
我用的也是TAKARA的，酶切体系看是做验证还是做回收，一般做个20ul体系，酶都加0.5ul，质粒根据浓度加，温度37℃，一般4,5个小时就可以完全切开....

嗯，我也是切了好几个小时，但出现过杂带切割不完整的现象，它们公司的NOT I好像不怎么活
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14楼2013-04-08 23:50:52
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wccc

银虫 (小有名气)
★
Marado(金币+1): 谢谢参与
是不是酶有问题了？或者酶的buffer不对?换个酶切前后顺序试试吧……
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3楼2012-12-06 13:39:45
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倾听世界0721

金虫 (小有名气)
★
Marado(金币+1): 谢谢参与
你确定只有一个BamHI酶切位点吗？这样看好像是有两个BamHI酶切位点，把你的序列放到WebCutter上看看试试，会不会漏掉了什么位点。
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4楼2012-12-06 13:45:53
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Marado

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 倾听世界0721 at 2012-12-06 13:45:53
你确定只有一个BamHI酶切位点吗？这样看好像是有两个BamHI酶切位点，把你的序列放到WebCutter上看看试试，会不会漏掉了什么位点。

非常确定！
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5楼2012-12-06 14:09:35
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