应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重组质粒转化，板子上总长杂菌
61/1返回列表
查看: 3027  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

674515734

铜虫 (小有名气)

[求助] 重组质粒转化，板子上总长杂菌

做质粒重组，做了好多次了，转化后板子上总是长很多杂菌。昨天转化涂板，总共长了9个菌落，全部挑菌培养，只有两个个摇出了，提质粒双酶切，却看不到小条带。
请问各位，板子总长杂菌会是哪里污染了？连接反应用的水都是灭完菌没用过的，加感受态细胞什么的也是在超净台操作，感受态细胞师姐们都在用，应该没有问题，板子是在4°冰箱放置。求解。。。。。。
回复此楼

» 猜你喜欢
在卑微中活出精彩，在短暂中寻求永恒。。。
1楼 2012-11-06 10:51:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-06 17:26:12
如果感受态没问题的话，是不是抗生素失效了。此外，你的插入片段很小吗？特别小的片段酶切后不是很容易看到，用0.3-0.5ug质粒做酶切，把整个体系都点进去。实在不行PCR鉴定一下。
赞一下 回复此楼
2楼2012-11-06 11:29:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

674515734

铜虫 (小有名气)
板子是十月份做的，到现在有二十天。插入的片段有750bp左右，如果切下来应该是能看到的。我在想是不是我操作过程中污染了，例如双酶切后割胶回收。
赞一下 回复此楼
在卑微中活出精彩，在短暂中寻求永恒。。。
3楼2012-11-06 15:51:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 674515734 at 2012-11-06 15:51:20
板子是十月份做的，到现在有二十天。插入的片段有750bp左右，如果切下来应该是能看到的。我在想是不是我操作过程中污染了，例如双酶切后割胶回收。

750bp应该比较容易看的。你提出的质粒有没有做个单酶切和载体质粒比较，分子量大小对吗？
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-07 07:53:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

674515734

铜虫 (小有名气)
质粒提完后跑了一下，条带是正确的。前天挑了所有的菌落，有一个摇出来了，这次双酶切我切了四个小时，看到小片段了。
赞一下 回复此楼
在卑微中活出精彩，在短暂中寻求永恒。。。
5楼2012-11-07 11:32:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haofei123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是操作过程出现了问题，例如是不是加的抗生素失活？尤其是在倒平板的时候培养基过热？
赞一下 回复此楼
6楼2012-11-07 22:45:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 674515734 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-29 19:27 by cqwQDCxMcL3I
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:54 by yCO1Ll7aHtsw
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 16:03 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 15:46 by etmYJ6d2rquH
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 4/200 2026-09-29 15:15 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 15:04 by etmYJ6d2rquH
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:58 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 6/300 2026-09-29 14:41 by etmYJ6d2rquH
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:24 by etmYJ6d2rquH
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +8 zju2000 2026-09-26 9/450 2026-09-29 13:47 by ahsoarli
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 09:59 by JzYBbHIXWSrW
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:42 by ZvyPK8n6Nfki
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:28 by ZvyPK8n6Nfki
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:46 by b8fCuTHqckEt
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:12 by b8fCuTHqckEt
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-28 22:32 by ez6fGg9abYaj
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:15 by ez6fGg9abYaj
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 18:51 by 9lS3ad5oOymn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭