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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组质粒，摇菌提取质粒后，如何测序？
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永远一片天

新虫 (正式写手)

[求助] 重组质粒，摇菌提取质粒后，如何测序？ 已有4人参与

重组质粒，摇菌提取质粒后，如何测序？用的是通用引物吗？提取质粒后还要不要再用特异性引物大量扩增产物？
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1楼 2014-02-10 19:15:34
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)
★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-11 15:19:51
你用的是什么质粒？是不是用什么试剂盒的？——不知道质粒（空载体）名称，谈何通用引物？

质粒提取后，消化RNA，取2微升跑电泳。泳带质量好的话，即可送去测序，当然还要说明用什么引物（自带，或哪种通用引物）。
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2楼2014-02-10 19:26:11
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baihaer

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-11 15:19:55
提取完质粒后直接找公司给你测序就可以，添一张公司（如华大、英潍捷基等）的测序表，因为质粒是你重组的所以目的基因长度、载体名称什么的你应该都知道，填完表连同质粒（一般去10μl足够）送公司测序。你的载体如果比较大众，就添通用引物不用自备，因为大部分载体引物公司都有。
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没有SB的事，只有SB的人
3楼2014-02-11 09:19:18
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jiaolong11a

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-12 13:43:43
提取质粒后，跑个胶，看看有没有提出来，然后送给公司测序，至于引物，看你目的了，如果有插入片段且只测插入片段的话，就给插入片段的引物，如果测通，就注明通用引物，当然要注明载体名称
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多情总被无情扰。。。愁
4楼2014-02-12 11:24:48
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你先PCR扩一下确定正确的质粒，再根据你所要目的基因片段的位置用引物测序，若通用引物合适就用通用引物就可以。
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hehe
5楼2014-02-12 20:52:07
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tmoonday

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
确定是哪种载体，然后用用这种载体的通用引物测序。当然也可以用自己基因的引物，但是如果插入的不是你要的片段，就会测不出来。
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等一份缘分
6楼2014-02-13 10:40:32
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