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永远一片天

新虫 (正式写手)

[求助] 重组质粒,摇菌提取质粒后,如何测序? 已有4人参与

重组质粒,摇菌提取质粒后,如何测序?用的是通用引物吗?提取质粒后还要不要再用特异性引物大量扩增产物?
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-11 15:19:51
你用的是什么质粒?是不是用什么试剂盒的?——不知道质粒(空载体)名称,谈何通用引物?

质粒提取后,消化RNA,取2微升跑电泳。泳带质量好的话,即可送去测序,当然还要说明用什么引物(自带,或哪种通用引物)。
2楼2014-02-10 19:26:11
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baihaer

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-11 15:19:55
提取完质粒后直接找公司给你测序就可以,添一张公司(如华大、英潍捷基等)的测序表,因为质粒是你重组的所以目的基因长度、载体名称什么的你应该都知道,填完表连同质粒(一般去10μl足够)送公司测序。你的载体如果比较大众,就添通用引物不用自备,因为大部分载体引物公司都有。
没有SB的事,只有SB的人
3楼2014-02-11 09:19:18
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jiaolong11a

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-02-12 13:43:43
提取质粒后,跑个胶,看看有没有提出来,然后送给公司测序,至于引物,看你目的了,如果有插入片段且只测插入片段的话,就给插入片段的引物,如果测通,就注明通用引物,当然要注明载体名称
多情总被无情扰。。。愁
4楼2014-02-12 11:24:48
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你先PCR扩一下确定正确的质粒,再根据你所要目的基因片段的位置用引物测序,若通用引物合适就用通用引物就可以。
hehe
5楼2014-02-12 20:52:07
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tmoonday

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
确定是哪种载体,然后用用这种载体的通用引物测序。当然也可以用自己基因的引物,但是如果插入的不是你要的片段,就会测不出来。
等一份缘分
6楼2014-02-13 10:40:32
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