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1066479423

银虫 (小有名气)

[求助] 重组质粒转化之前需要酶切验证吗

构建好的载体,需要酶切或是别的试验进行验证以后才能进行转化吗?能直接转到感受态细菌中吗?谢谢
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yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1066479423: 金币+3, ★★★很有帮助, 好的,谢谢 2013-03-05 10:31:23
载体在连接以后,不就已经转化到到感受态(如大肠杆菌)中了吗?你说的 构建好的载体,指的是什么?是不是已经经过酶切或者其他手段验证了。
在转化前可以不必验证,但是转化到新的感受态(如农杆菌)以后,可以做个菌落PCR什么的,验证一下。
2楼2013-03-05 10:10:01
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
载体不需要单独酶切鉴定吧,连接以后酶切就好啊
让复杂的事情变简单,简单的事情更简单
3楼2013-03-05 10:16:28
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1066479423

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 静安jingan at 2013-03-05 10:16:28
载体不需要单独酶切鉴定吧,连接以后酶切就好啊

好的。谢谢
4楼2013-03-05 10:32:18
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

构建完了之后就转化,转化完了再做菌落PCR或者提质粒酶切验证呗。只有在酶切和连接出问题的时候,才会在连接完了之后PCR验证一下有没有插入目的片段。
5楼2013-03-05 13:56:58
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

构建完了之后就转化,转化完了再做菌落PCR或者提质粒酶切验证呗。只有在酶切和连接出问题的时候,才会在连接完了之后PCR验证一下有没有插入目的片段。
6楼2013-03-05 14:15:37
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