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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重组质粒转化之前需要酶切验证吗
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1066479423

银虫 (小有名气)

[求助] 重组质粒转化之前需要酶切验证吗

构建好的载体，需要酶切或是别的试验进行验证以后才能进行转化吗？能直接转到感受态细菌中吗？谢谢
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1楼 2013-03-05 09:55:50
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yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1066479423: 金币+3, ★★★很有帮助, 好的，谢谢 2013-03-05 10:31:23
载体在连接以后，不就已经转化到到感受态（如大肠杆菌）中了吗？你说的 构建好的载体，指的是什么？是不是已经经过酶切或者其他手段验证了。
在转化前可以不必验证，但是转化到新的感受态（如农杆菌）以后，可以做个菌落PCR什么的，验证一下。
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2楼2013-03-05 10:10:01
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
载体不需要单独酶切鉴定吧，连接以后酶切就好啊
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让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
3楼2013-03-05 10:16:28
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1066479423

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 静安jingan at 2013-03-05 10:16:28
载体不需要单独酶切鉴定吧，连接以后酶切就好啊

好的。谢谢
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4楼2013-03-05 10:32:18
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)
构建完了之后就转化，转化完了再做菌落PCR或者提质粒酶切验证呗。只有在酶切和连接出问题的时候，才会在连接完了之后PCR验证一下有没有插入目的片段。
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5楼2013-03-05 13:56:58
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)
构建完了之后就转化，转化完了再做菌落PCR或者提质粒酶切验证呗。只有在酶切和连接出问题的时候，才会在连接完了之后PCR验证一下有没有插入目的片段。
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6楼2013-03-05 14:15:37
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