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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】重组质粒转化
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】重组质粒转化已有18人参与

重组质粒转化后长出来的菌很少，这是为什么啊！
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1楼2010-07-20 12:13:55
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
转化效率低
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
2楼2010-07-20 12:37:02
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andyduan

禁虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):谢谢回答 2010-07-22 09:15:11
本帖内容被屏蔽
3楼2010-07-20 12:43:28
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jqq1985

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一个可能是载体量比较少，另一个可能是感受态细胞的转化效率低
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4楼2010-07-20 13:28:51
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shenlin0514

木虫 (正式写手)

无名小虫
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
补充3楼，可能还存在转化操作手法的影响
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Never say never
5楼2010-07-20 13:35:14
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leileihmr

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+3):鼓励新虫+谢谢回答 2010-07-22 09:15:43
新手的话一定注意做对照，阳性、阴性都要做，阳性：转质粒的，阴性：转质粒自连的。这样就能基本分析出问题出在哪了。另外感受态放久了也是长得比较少，都不重要，重要的是这几个或十几个菌里有你要的重组菌！
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6楼2010-07-20 14:35:17
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 睡着数绵羊 at 2010-07-20 12:13:55:
重组质粒转化后长出来的菌很少，这是为什么啊！

可是提出来的质粒酶切和空的一样，是不是没有连上啊
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7楼2010-07-21 23:07:02
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dhmdddd

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励交流 2010-07-22 09:15:57
如果是你说的连的和空载质粒是一样大的，那就是没有转上，制备感受态时细胞的浓度也会导致板上长出的转化子比较少！
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上班族，学习ing……
8楼2010-07-22 08:43:20
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lhl_666

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+5):新人鼓励+热心回答 2010-07-23 20:05:19
连接片段的时候，两种片段的比例一般是1：3或者2：3，当然还要视片段的具体浓度而定。载体过多的话，可能会自连，导致转化子大小与空载体的大小基本相同。
除了前辈们提到的感受态细胞的转化效率、操作技术的影响以外，筛选转化子的平板中，抗生素的浓度也是一个关键问题吧。
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9楼2010-07-22 14:01:53
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dhmdddd at 2010-07-22 08:43:20:
如果是你说的连的和空载质粒是一样大的，那就是没有转上，制备感受态时细胞的浓度也会导致板上长出的转化子比较少！

这些应该都不是问题吧，我担心是不是目的片段没有有切开啊，在设计引物的时候加了保护碱基的，这个可能性有吗?
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10楼2010-07-23 11:16:36
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