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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】怎样区分空载和重组质粒？
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】怎样区分空载和重组质粒？已有8人参与

转化后在抗性平板上长出的菌落，怎样区分那个是空载体哪个是重组质粒？
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1楼2010-07-08 17:11:28
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
★
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如果不是蓝白斑筛选的话,从外形上是看不出来的,不过可以先做菌落PCR,若扩出目的带则可能是重组质粒,但也有例外,会出现假阳性.可以先做菌落PCR,选有带的提质粒,再检测
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2楼2010-07-08 17:26:43
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
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酶切或者菌落PCR
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3楼2010-07-08 17:46:34
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

好的！

引用回帖:
Originally posted by 小猫三两只 at 2010-07-08 17:26:43:
如果不是蓝白斑筛选的话,从外形上是看不出来的,不过可以先做菌落PCR,若扩出目的带则可能是重组质粒,但也有例外,会出现假阳性.可以先做菌落PCR,选有带的提质粒,再检测

好，我明天做一下。
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4楼2010-07-08 17:59:47
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

谢谢！

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-07-08 17:46:34:
酶切或者菌落PCR

酶切估计不行，因为质粒提不出来。做了菌落PCR了，还没有重新提质粒呢。我试试，
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5楼2010-07-08 18:01:04
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jqq1985

银虫 (正式写手)
提质粒，酶切验证
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6楼2010-07-09 10:33:05
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liouwzh

木虫 (正式写手)
★
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能够用蓝白斑筛选最好，不能蓝白筛选只能菌落PCR。
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7楼2010-07-09 10:50:57
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酶切。我是不推荐用PCR来验证的，
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8楼2010-07-09 11:28:34
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ottolzm

木虫 (正式写手)
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lstt09nk(金币+1):是的~ 2010-07-09 12:13:56
菌落PCR 假阳性很多  只能作初步验证  最好的还是做酶切
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9楼2010-07-09 12:12:10
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
蓝白斑筛选、菌落PCR、酶切、测序
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10楼2010-07-09 12:13:26
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