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zwlr116812

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[交流] 【求助/交流】重组子酶切验证很奇怪已有4人参与

请教各位，我的质粒载体有4.87kbp, 带有绿色荧光蛋白的质粒4.1kbp,双酶切这两种质粒，胶回收目的片段，把GFP片段(700bp）连接到载体上转入大肠杆菌，得到转化子，在荧光显微镜下看到很强的绿色荧光。再提取这个转化子得质粒，条带在4kbp-7kbp之间，理论上应该在5.5kbp.双酶切后，出现两条条带，上面一条在2kbp左右，下面一条在700bp左右。单酶切只有一条条带在3000bp左右。这是怎么回事，切了好几次都是这样的结果

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1楼 2011-03-31 21:01:01

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西瓜

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dhd997(金币+6): good 2011-04-01 08:41:45

既然重组子已经看到荧光了，基本不会是没连上了。
双酶切两条条带加起来也快3000了，似乎和单酶切的结果相印证呢。
有没有可能是载体本来就只有2000多呢？瞎猜的，哈哈哈~

你双酶切用的是把GFP克隆进去的那对酶吧？不如换其他酶来切看看。

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2楼2011-03-31 22:18:25

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zwlr116812

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引用回帖:

Originally posted by 西瓜 at 2011-03-31 22:18:25:
既然重组子已经看到荧光了，基本不会是没连上了。
双酶切两条条带加起来也快3000了，似乎和单酶切的结果相印证呢。
有没有可能是载体本来就只有2000多呢？瞎猜的，哈哈哈~

你双酶切用的是把GFP克隆进去的那对 ...

载体本来是4.87kbp,双酶切后就没切掉多少，胶回收后条带在4kbp以上。后来验证时切重组子是用的先前的两个酶。

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3楼2011-04-01 08:41:14

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