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zwlr116812

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】重组子酶切验证很奇怪 已有4人参与

请教各位,我的质粒载体有4.87kbp, 带有绿色荧光蛋白的质粒4.1kbp,双酶切这两种质粒,胶回收目的片段,把GFP片段(700bp)连接到载体上转入大肠杆菌,得到转化子,在荧光显微镜下看到很强的绿色荧光。再提取这个转化子得质粒,条带在4kbp-7kbp之间,理论上应该在5.5kbp.双酶切后,出现两条条带,上面一条在2kbp左右,下面一条在700bp左右。单酶切只有一条条带在3000bp左右。这是怎么回事,切了好几次都是这样的结果
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zwlr116812

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-03-31 22:18:25:
既然重组子已经看到荧光了,基本不会是没连上了。
双酶切两条条带加起来也快3000了,似乎和单酶切的结果相印证呢。
有没有可能是载体本来就只有2000多呢?瞎猜的,哈哈哈~

你双酶切用的是把GFP克隆进去的那对 ...

载体本来是4.87kbp,双酶切后就没切掉多少,胶回收后条带在4kbp以上。后来验证时切重组子是用的先前的两个酶。
3楼2011-04-01 08:41:14
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+6): good 2011-04-01 08:41:45
既然重组子已经看到荧光了,基本不会是没连上了。
双酶切两条条带加起来也快3000了,似乎和单酶切的结果相印证呢。
有没有可能是载体本来就只有2000多呢?瞎猜的,哈哈哈~

你双酶切用的是把GFP克隆进去的那对酶吧?不如换其他酶来切看看。
2楼2011-03-31 22:18:25
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liugs

禁虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-04-03 08:50:56
本帖内容被屏蔽

4楼2011-04-03 07:34:00
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