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相同质粒,不同的单克隆有的不能表达?
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yuluoqiutong
木虫
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[交流]
相同质粒,不同的单克隆有的不能表达?
我的重组质粒一开始在DH5a,后来因为表达量较低,就挑单克隆提取质粒转到BL21里,涂板后长出一些单克隆,每次表达时就随机挑取上面的一个菌落进行摇菌扩大培养。但是有时纯化后一点点蛋白都没有得到,这是为什么呢?
还有一个问题是,相同的一个单克隆前一段时间蛋白表达量较高,过一段时间就降低了,这又是为什么呢?
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2012-04-16 14:23:20
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susizheng
木虫
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yuluoqiutong: 金币+1
2012-04-27 16:21:43
工程菌一般容易出现这种老化的现象,所以一般采用保存质粒,每次表达新转化。
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2楼
2012-04-16 15:52:29
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迷失人鱼
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我也遇到同样的问题。学习了!谢谢!
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3楼
2012-04-16 18:46:58
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xiaogang0301
铜虫
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表达量低或者不表达 和你的基因也有关系吧
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4楼
2012-04-18 17:32:26
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jqq1985
银虫
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★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
以前做葡萄糖苷酶遇到这样的情况,测序成功的质粒,电转化以后挑四个单克隆,2个有酶活,两个没有活性;将有酶活的一个转化子的质粒提出后继续电转化,挑了两个,又是一个有酶活一个没有活性。不知道为什么。
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5楼
2012-05-02 21:01:24
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