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yuluoqiutong

木虫 (正式写手)


[交流] 相同质粒,不同的单克隆有的不能表达?

我的重组质粒一开始在DH5a,后来因为表达量较低,就挑单克隆提取质粒转到BL21里,涂板后长出一些单克隆,每次表达时就随机挑取上面的一个菌落进行摇菌扩大培养。但是有时纯化后一点点蛋白都没有得到,这是为什么呢?
还有一个问题是,相同的一个单克隆前一段时间蛋白表达量较高,过一段时间就降低了,这又是为什么呢?
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jqq1985

银虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
以前做葡萄糖苷酶遇到这样的情况,测序成功的质粒,电转化以后挑四个单克隆,2个有酶活,两个没有活性;将有酶活的一个转化子的质粒提出后继续电转化,挑了两个,又是一个有酶活一个没有活性。不知道为什么。
5楼2012-05-02 21:01:24
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★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
yuluoqiutong: 金币+1 2012-04-27 16:21:43
工程菌一般容易出现这种老化的现象,所以一般采用保存质粒,每次表达新转化。
2楼2012-04-16 15:52:29
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迷失人鱼

金虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也遇到同样的问题。学习了!谢谢!
3楼2012-04-16 18:46:58
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xiaogang0301

铜虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
表达量低或者不表达 和你的基因也有关系吧
4楼2012-04-18 17:32:26
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