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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 相同质粒，不同的单克隆有的不能表达？
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yuluoqiutong

木虫 (正式写手)

[交流] 相同质粒，不同的单克隆有的不能表达？

我的重组质粒一开始在DH5a,后来因为表达量较低，就挑单克隆提取质粒转到BL21里，涂板后长出一些单克隆，每次表达时就随机挑取上面的一个菌落进行摇菌扩大培养。但是有时纯化后一点点蛋白都没有得到，这是为什么呢？
还有一个问题是，相同的一个单克隆前一段时间蛋白表达量较高，过一段时间就降低了，这又是为什么呢？
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1楼 2012-04-16 14:23:20
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jqq1985

银虫 (正式写手)
★
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以前做葡萄糖苷酶遇到这样的情况，测序成功的质粒，电转化以后挑四个单克隆，2个有酶活，两个没有活性；将有酶活的一个转化子的质粒提出后继续电转化，挑了两个，又是一个有酶活一个没有活性。不知道为什么。
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5楼2012-05-02 21:01:24
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susizheng

木虫 (著名写手)
★ ★
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yuluoqiutong: 金币+1 2012-04-27 16:21:43
工程菌一般容易出现这种老化的现象，所以一般采用保存质粒，每次表达新转化。
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2楼2012-04-16 15:52:29
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迷失人鱼

金虫 (小有名气)
★
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我也遇到同样的问题。学习了！谢谢！
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3楼2012-04-16 18:46:58
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xiaogang0301

铜虫 (初入文坛)
★
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表达量低或者不表达 和你的基因也有关系吧
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4楼2012-04-18 17:32:26
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