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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】单克隆摇菌16小时后LB液体培养基还没有变混浊求原因
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jen1006

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】单克隆摇菌16小时后LB液体培养基还没有变混浊求原因 已有19人参与

DH5a菌种，LB液体培养基分装几管1.5ml离心管（400ulLB培养基+0.4ulAmp），挑单克隆没问题！37°，260转，摇了16h后仍然没见混浊，跪求正解！！！
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1楼 2011-01-08 10:28:05
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★
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dhd997(金币+1):有可能 2011-01-08 12:23:32
可能是板子有问题，长出来的是假阳性。
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Thank-you，so-blue.
2楼2011-01-08 12:18:45
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j2

木虫 (正式写手)
★
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1.5的EP管摇菌？好节约啊。这样可以吗？请教~
氨苄的量加多了不长？要不就LS说的，假阳性？
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
3楼2011-01-08 13:05:16
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+3):good 2011-01-08 14:49:16
reasonspare:谢谢你的分享，其实楼上说的板子，我们可以通常认为是筛选克隆子所用的平板，如果筛选的平板有问题，自然后可以挑到假阳性克隆，所以二楼的板子还是有关系，在者斑竹加分还是有标准的，这就是为什么同一个斑竹给了2楼1各金币，而你的应助值3各金币。希望这样解释你的疑问。 2011-01-12 07:51:27
二楼，这跟板子有什么关系？而且版主还给莫名其妙的奖励了？

个人认为的原因：

1：EP管子你怎么摇啊？能摇开吗？可以尝试用大离心管来摇菌，抗生素按比例加入！

2：抗生素浓度过大，可以降低浓度

3：菌中的质粒丢失，导致菌不长！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-01-08 14:43:56
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ankang0910

金虫 (正式写手)
★ ★
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rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~~ 2011-01-08 22:38:31
胡说，1.5EP管怎么不能摇菌了。二楼说的有道理。
可能没连上，挑的都是空载体。如果是这个原因，建议连接时降低载体加入量。
也可能抗性没有加均匀，若是每管每管的加，Amp100按1:1000往里加，楼主抗性加的合适，不多，因为氨苄抗性本来就不强，再多加些也能摇浑。
希望提供更多信息。
P.S.这样摇菌信号弱。
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实验顺利！！
5楼2011-01-08 22:10:22
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

优秀版主
★
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不知道你的氨苄浓度时多少，

如果氨苄是通用的浓度的话，

那么你的氨苄加的太多了。

另：1.5ml的管子可以摇菌，没问题
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千万不要因为走的太久，而忘记了我们为什么出发~~~~~~ForDream~~~~~~
6楼2011-01-08 22:40:11
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
★
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amp 失效很快的。

1.5的管子可以摇菌。
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7楼2011-01-08 22:57:31
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jen1006

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by ankang0910 at 2011-01-08 22:10:22:
胡说，1.5EP管怎么不能摇菌了。二楼说的有道理。
可能没连上，挑的都是空载体。如果是这个原因，建议连接时降低载体加入量。
也可能抗性没有加均匀，若是每管每管的加，Amp100按1:1000往里加，楼主抗性加的合适 ...

谢谢啊，了然一二
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8楼2011-01-10 10:27:10
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jen1006

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by ankang0910 at 2011-01-08 22:10:22:
胡说，1.5EP管怎么不能摇菌了。二楼说的有道理。
可能没连上，挑的都是空载体。如果是这个原因，建议连接时降低载体加入量。
也可能抗性没有加均匀，若是每管每管的加，Amp100按1:1000往里加，楼主抗性加的合适 ...

对了，我是用10ul枪头挑菌的，会不会是我菌挑的不好？
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9楼2011-01-10 10:30:28
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★ ★
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silicare(金币+2):假阳性，杂菌 2011-01-10 11:54:57
呵呵，1.5mL的EP是可以摇菌的，只是浓度不如通气状况好的时候。

有可能挑的菌是假阳性。

最坏的可能就是噬菌体。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
10楼2011-01-10 10:33:28
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