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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】目的基因克隆总不成功
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森林7631

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】目的基因克隆总不成功 已有5人参与

我要克隆真菌中的一个酶基因，这个菌种中在网上没有相关酶基因序列的报道，这个酶基因在NCBI上也基本都是细菌和放线菌中的此酶基因序列，所以在基因扩增中出现问题，望大家给予帮助，谢谢！
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Time lost can not be recalled.
1楼 2010-06-23 21:22:42
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★
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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-24 08:47:11
好歹要找真核物种的序列来比较吧，细菌放线菌都不好使

有文库么？P不出来，保守性不好的话筛库看看

再不行就纯化蛋白测氨基酸序列往回推
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2楼2010-06-23 21:36:10
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mgangle

铁杆木虫 (著名写手)

乐乐家族-----乐颠颠
★
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应该要找同源性较高的物种的序列，然后比较出保守型高的区段，再设计引物扩增！
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麦兜麦兜~~~我要一碗鱼丸粗面。。对不起，么有鱼丸粗面。。那，我要鱼丸么有鱼丸那，我要粗面…………么有粗面那，我要鱼丸粗面……………………
3楼2010-06-24 14:06:22
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himoo123

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
同意，你好歹也找点同源性高点的来对比下基因序列啊。。
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4楼2010-06-24 14:50:36
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森林7631

铜虫 (小有名气)
我也想找同源性高的，但是没有真菌中的基因序列参考啊，设计的简并引物进行的扩增，获得一段500bp的序列，编码成氨基酸序列也正确，但现在再验证扩增就扩不出来了，
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Time lost can not be recalled.
5楼2010-07-01 10:11:10
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
比较头疼的问题。lz可否再详细说说
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
6楼2010-07-01 16:15:31
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