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【求助/交流】目的基因克隆总不成功
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森林7631
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专业: 生物化学
[交流]
【求助/交流】目的基因克隆总不成功
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我要克隆真菌中的一个酶基因,这个菌种中在网上没有相关酶基因序列的报道,这个酶基因在NCBI上也基本都是细菌和放线菌中的此酶基因序列,所以在基因扩增中出现问题,望大家给予帮助,谢谢!
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2010-06-23 21:22:42
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森林7631
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专业: 生物化学
我也想找同源性高的,但是没有真菌中的基因序列参考啊,设计的简并引物进行的扩增,获得一段500bp的序列,编码成氨基酸序列也正确,但现在再验证扩增就扩不出来了,
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5楼
2010-07-01 10:11:10
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ben1147
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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-24 08:47:11
好歹要找真核物种的序列来比较吧,细菌放线菌都不好使
有文库么?P不出来,保守性不好的话筛库看看
再不行就纯化蛋白测氨基酸序列往回推
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2楼
2010-06-23 21:36:10
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mgangle
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专业: 植物病理学
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小木虫(金币
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应该要找同源性较高的物种的序列,然后比较出保守型高的区段,再设计引物扩增!
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麦兜麦兜~~~我要一碗鱼丸粗面。。对不起,么有鱼丸粗面。。那,我要鱼丸么有鱼丸那,我要粗面…………么有粗面那,我要鱼丸粗面……………………
3楼
2010-06-24 14:06:22
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himoo123
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小木虫(金币
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同意,你好歹也找点同源性高点的来对比下基因序列啊。。
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4楼
2010-06-24 14:50:36
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