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jen1006

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】单克隆摇菌16小时后LB液体培养基还没有变混浊求原因 已有19人参与

DH5a菌种,LB液体培养基分装几管1.5ml离心管(400ulLB培养基+0.4ulAmp),挑单克隆没问题!37°,260转,摇了16h后仍然没见混浊,跪求正解!!!
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):有可能 2011-01-08 12:23:32
可能是板子有问题,长出来的是假阳性。
Thank-you,so-blue.
2楼2011-01-08 12:18:45
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j2

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1.5的EP管摇菌?好节约啊。这样可以吗?请教~
氨苄的量加多了不长?要不就LS说的,假阳性?
修炼ing,当虫仙……
3楼2011-01-08 13:05:16
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+3):good 2011-01-08 14:49:16
reasonspare:谢谢你的分享,其实楼上说的板子,我们可以通常认为是筛选克隆子所用的平板,如果筛选的平板有问题,自然后可以挑到假阳性克隆,所以二楼的板子还是有关系,在者斑竹加分还是有标准的,这就是为什么同一个斑竹给了2楼1各金币,而你的应助值3各金币。希望这样解释你的疑问。 2011-01-12 07:51:27
二楼,这跟板子有什么关系?而且版主还给莫名其妙的奖励了?

个人认为的原因:

1:EP管子你怎么摇啊?能摇开吗?可以尝试用大离心管来摇菌,抗生素按比例加入!

2:抗生素浓度过大,可以降低浓度

3:菌中的质粒丢失,导致菌不长!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-01-08 14:43:56
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ankang0910

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~~ 2011-01-08 22:38:31
胡说,1.5EP管怎么不能摇菌了。二楼说的有道理。
可能没连上,挑的都是空载体。如果是这个原因,建议连接时降低载体加入量。
也可能抗性没有加均匀,若是每管每管的加,Amp100按1:1000往里加,楼主抗性加的合适,不多,因为氨苄抗性本来就不强,再多加些也能摇浑。
希望提供更多信息。
P.S.这样摇菌信号弱。
实验顺利!!
5楼2011-01-08 22:10:22
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不知道你的氨苄浓度时多少,

如果氨苄是通用的浓度的话,

那么你的氨苄加的太多了。

另:1.5ml的管子可以摇菌,没问题
千万不要因为走的太久,而忘记了我们为什么出发~~~~~~ForDream~~~~~~
6楼2011-01-08 22:40:11
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amp 失效很快的。

1.5的管子可以摇菌。
7楼2011-01-08 22:57:31
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jen1006

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by ankang0910 at 2011-01-08 22:10:22:
胡说,1.5EP管怎么不能摇菌了。二楼说的有道理。
可能没连上,挑的都是空载体。如果是这个原因,建议连接时降低载体加入量。
也可能抗性没有加均匀,若是每管每管的加,Amp100按1:1000往里加,楼主抗性加的合适 ...

谢谢啊,了然一二
8楼2011-01-10 10:27:10
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jen1006

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by ankang0910 at 2011-01-08 22:10:22:
胡说,1.5EP管怎么不能摇菌了。二楼说的有道理。
可能没连上,挑的都是空载体。如果是这个原因,建议连接时降低载体加入量。
也可能抗性没有加均匀,若是每管每管的加,Amp100按1:1000往里加,楼主抗性加的合适 ...

对了,我是用10ul枪头挑菌的,会不会是我菌挑的不好?
9楼2011-01-10 10:30:28
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

★ ★ ★
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silicare(金币+2):假阳性,杂菌 2011-01-10 11:54:57
呵呵,1.5mL的EP是可以摇菌的,只是浓度不如通气状况好的时候。

有可能挑的菌是假阳性。

最坏的可能就是噬菌体。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
10楼2011-01-10 10:33:28
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