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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 原核表达重组质粒提取
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芥末猫

银虫 (小有名气)

[交流] 原核表达重组质粒提取已有6人参与

菌液pcr检测有微弱的目的条带，扩大培养，离心有沉淀，提质粒，电泳检测没带，测浓度5-11, 是不是水加多了，浓度太低？能不能去测序呢
有沉淀是不是就是有质粒的意思啊？
急，求教
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1楼2012-05-12 17:36:03
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fly12365

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看天: 金币+4, 鼓励 常来 2012-05-13 00:05:33
你的载体是什么载体？有可能是载体拷贝少。菌液离心后的沉淀是菌体的沉淀，电泳没条带，而检测显示数据可能是溶解液有杂质；浓度低还有可能是加裂解液时摇晃剧烈；另一个原因可能是培养时间过长使菌体死亡，从而质粒部分没法提出
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2楼2012-05-12 21:59:51
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xiongyaoling

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
质粒浓度太底，会导致信号弱，不能用来测序！
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3楼2012-05-13 08:58:30
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Apeterson

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
测序应该是不能，你的浓度太低了，看来楼主还是要重新再提一下。。
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考研奋斗中····
4楼2012-05-13 09:36:39
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zhsDONG

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
只要你的转化子能够P出目的片段，就应该可以测序！直接拿菌液测序呀！
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5楼2012-05-13 14:32:01
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
即使浓度低也能测序的，因为公司通常做法是，拿到质粒后会自己做转化，提质粒测序。
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Thank-you，so-blue.
6楼2012-05-13 20:53:13
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芥末猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhsDONG at 2012-05-13 14:32:01:
只要你的转化子能够P出目的片段，就应该可以测序！直接拿菌液测序呀！

但是菌液的条带很暗，而且同时还有像是引物二聚体的带，挺亮的
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7楼2012-05-14 10:16:45
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viki_MDK

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
根据经验，应该是假阳性，有可能是没有质粒的。
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8楼2012-05-14 10:38:59
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