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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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芥末猫

银虫 (小有名气)

[交流] 原核表达重组质粒提取 已有6人参与

菌液pcr检测有微弱的目的条带,扩大培养,离心有沉淀,提质粒,电泳检测没带,测浓度5-11, 是不是水加多了,浓度太低?能不能去测序呢
有沉淀是不是就是有质粒的意思啊?
急,求教
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fly12365

铜虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看天: 金币+4, 鼓励 常来 2012-05-13 00:05:33
你的载体是什么载体?有可能是载体拷贝少。菌液离心后的沉淀是菌体的沉淀,电泳没条带,而检测显示数据可能是溶解液有杂质;浓度低还有可能是加裂解液时摇晃剧烈;另一个原因可能是培养时间过长使菌体死亡,从而质粒部分没法提出
2楼2012-05-12 21:59:51
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xiongyaoling

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
质粒浓度太底,会导致信号弱,不能用来测序!
3楼2012-05-13 08:58:30
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Apeterson

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
测序应该是不能,你的浓度太低了,看来楼主还是要重新再提一下。。
考研奋斗中····
4楼2012-05-13 09:36:39
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zhsDONG

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
只要你的转化子能够P出目的片段,就应该可以测序!直接拿菌液测序呀!
5楼2012-05-13 14:32:01
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
即使浓度低也能测序的,因为公司通常做法是,拿到质粒后会自己做转化,提质粒测序。
Thank-you,so-blue.
6楼2012-05-13 20:53:13
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芥末猫

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zhsDONG at 2012-05-13 14:32:01:
只要你的转化子能够P出目的片段,就应该可以测序!直接拿菌液测序呀!

但是菌液的条带很暗,而且同时还有像是引物二聚体的带,挺亮的
7楼2012-05-14 10:16:45
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viki_MDK

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
根据经验,应该是假阳性,有可能是没有质粒的。
8楼2012-05-14 10:38:59
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