| 查看: 2206 | 回复: 13 | ||
zhiqiang5070木虫 (正式写手)
|
[求助]
[size=5]外源基因原核表达遭遇种种瓶颈，求各位高手近来解答[/size]
|
|
我做的是交替氧化酶在大肠杆菌里的表达。实验步骤如下：将RNA反转录成DNA，通过action引物验证没问题，通过特异引物PCR，回收纯化，连接到T载体，成功转化。菌液送测，无问题。提质粒，酶切，回收纯化，连接到酶切纯化后的ｐET28a上。然后转化进BL21中。送测，没问题，用IPTG诱导，可是又到不出来，SDS-PAGE老是无目的带。 后面又重提T载体质粒开始做，可是做了2次都没有转化BL21成功。对连接产物做凝胶成像符合预期。 这是肿么了？哪里出问题了？ 打算重头开始做，又找不到问题所在，害怕徒劳无功啊。大家帮忙提建议啦，谢谢。。。。本人小虫，金币不多，还望见谅。 PS：我的目的片段5‘端有两个ATG，内切酶SacI 和XhoI ，两者相距２１ｂｐ。 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有78人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 实验到了瓶颈，求高手帮助。
已经有12人回复
- 关于SacI和XhoI酶切位点？
已经有7人回复
- 原核表达重组表达载体的连问题
已经有14人回复
- pET28a载体蛋白表达为包涵体
已经有5人回复
- PCR产物纯化后酶切，连接
已经有28人回复
- 原核表达大量出不来结果
已经有4人回复
- 原核基因表达可否把表达盒串联
已经有4人回复
- 原核表达重组质粒提取
已经有7人回复
- T7载体的IPTG诱导
已经有10人回复
- 请教各位高人，基因克隆表达的流程是什么？
已经有8人回复
- 急，基因池筛选出的多态性引物为什么用构建池的单株验证就重复不出多态性了？
已经有4人回复
- 含信号肽的序列能否在原核表达系统PET-32a中表达
已经有7人回复
- 多个亚基蛋白 ORF串联表达
已经有9人回复
- 原核表达蛋白诱导不出来
已经有16人回复
- 关于原核表达中，IPTG,KAN等的配制和最终工作浓度问题！！！
已经有16人回复
- 我好像遇到了瓶颈期
已经有27人回复
- 外源基因在酵母中表达
已经有7人回复
- 做了热重，如何通过得到的数据画热重曲线图，求高手解答！
已经有11人回复
- 关于外源基因导入的想法
已经有4人回复
- 【求助/交流】请问大家：将外源DNA与载体连接的体系怎么确定啊？
已经有7人回复
- 【求助/交流】请教关于毕赤酵母表达外源基因
已经有5人回复
- 【求助/交流】原核表达羊基因，cDNA长度约为3kb，基因为一种有活性的酶
已经有15人回复
- 【求助/交流】急！关于外源基因在丝状真菌中的融合表达
已经有8人回复
- 【求助/交流】枯草中表达外源基因，有蛋白，但是没有酶活，是什么原因？
已经有4人回复
- 【分享】Tinker 5出来啦！
已经有5人回复
- [求助]原核表达如何减少包涵体
已经有23人回复
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
2楼2012-02-07 11:30:20
lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
- MolEPI: 58
- 应助: 388 (硕士)
- 贵宾: 0.238
- 金币: 17138.7
- 红花: 43
- 帖子: 2251
- 在线: 712.4小时
- 虫号: 111074
- 注册: 2005-11-20
- 专业: 生物化学
3楼2012-02-07 12:54:25
zhiqiang5070
木虫 (正式写手)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 2711.4
- 散金: 66
- 红花: 1
- 帖子: 459
- 在线: 117小时
- 虫号: 743352
- 注册: 2009-04-08
- 性别: GG
- 专业: 抗肿瘤药物药理
4楼2012-02-07 14:20:04
5楼2012-02-08 08:26:58
86964109
木虫 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 1794.3
- 帖子: 163
- 在线: 104.8小时
- 虫号: 517562
- 注册: 2008-03-04
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
6楼2012-02-08 09:21:40
whb21
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 105 (高中生)
- 金币: 9711.3
- 散金: 625
- 红花: 7
- 帖子: 2994
- 在线: 172.4小时
- 虫号: 928584
- 注册: 2009-12-15
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
7楼2012-02-08 14:51:52
cnliu51
金虫 (小有名气)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 1811.4
- 帖子: 76
- 在线: 68小时
- 虫号: 689828
- 注册: 2009-01-08
- 性别: GG
- 专业: 水产生物遗传育种学
8楼2012-02-09 10:55:08
zhiqiang5070
木虫 (正式写手)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 2711.4
- 散金: 66
- 红花: 1
- 帖子: 459
- 在线: 117小时
- 虫号: 743352
- 注册: 2009-04-08
- 性别: GG
- 专业: 抗肿瘤药物药理
9楼2012-02-10 09:46:53
zhiqiang5070
木虫 (正式写手)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 2711.4
- 散金: 66
- 红花: 1
- 帖子: 459
- 在线: 117小时
- 虫号: 743352
- 注册: 2009-04-08
- 性别: GG
- 专业: 抗肿瘤药物药理
10楼2012-02-10 09:47:16