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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达大量出不来结果
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shijie2280

新虫 (初入文坛)

[求助] 原核表达大量出不来结果

我表达结核杆菌的一个基因，虽然小量表达时有明显调大，但为什么大量表达时总表达不出来呢？求高手指点
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1楼 2012-12-28 10:14:28
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用的什么载体，pet28a吗？ 大量表达和小量表达时用的诱导条件是否一致，IPTG、温度、时间等
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科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
2楼2012-12-28 11:15:12
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shijie2280

新虫 (初入文坛)
pGEX4T-1,带GST标签的，所有的都一样
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3楼2012-12-28 11:56:05
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molecula

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

如果是载体表达的话，大量表达的情况下有时候会出现堵塞效应。
换句话说，你挑的量太大了，以至于这个基因表达的路线被堵塞了，转而进行了其他结构性基因的表达了。
你试一试调低一点表达。看看是不是能做出来。
再就是菌浓度太高也会抑制表达。
你试一下不要培养太久。
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4楼2013-01-04 12:48:51
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

我也是pGEX-4T-1的融合表达，没有碰到楼主所说的这种情况，首先你可以从小量诱导下手，先优化一下小量诱导的条件，使表达量最大化，然后用这个条件再去做做大量表达试试看，一般少量表达可以大量表达是不会出什么问题的.
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
5楼2013-01-04 14:14:21
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