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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达大的核苷酸序列容易表达吗？
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nnsulei

金虫 (正式写手)

[交流] 原核表达大的核苷酸序列容易表达吗？ 已有3人参与

我最近做原核表达怎么也表达不出来，不知道是什么原因啊！目的基因1431bp。我的表达菌是BL21,载体是PGEX-6P-1,加TPTG诱导37度/3h.
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努力做就有结果～
1楼 2011-06-17 16:51:58
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+5, EPI+1): 言简意赅，涉及很多方面，楼主可据此一一检查哦 2011-06-17 20:06:17
引用回帖:
Originally posted by nnsulei at 2011-06-17 16:51:58:
我最近做原核表达怎么也表达不出来，不知道是什么原因啊！目的基因1431bp。我的表达菌是BL21,载体是PGEX-6P-1,加TPTG诱导37度/3h.

1431bp基因不算大的，文献100KD的蛋白都能表达出来。能不能表达和表达的量跟表达体系有关，比如载体、宿主，也跟表达条件、要表达蛋白的性质有关，而且跟基因的来源也有关，涉及密码子偏爱性问题。
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2楼2011-06-17 18:26:49
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+5, EPI+1): 切实可行！ 2011-06-17 20:07:03
西瓜: 专家考核存档 2011-06-17 20:47:29
1:确定好你的基因成功连接至载体上了；
2：可以尝试不同温度，不同培养时间，不同的IPTG浓度进行诱导。
3：实在不行，换载体，换宿主。
赞一下(3人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-06-17 19:33:02
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DNA_STR

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
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西瓜(金币+2): 欢迎交流 2011-06-18 21:54:47
Taq酶基因2496bp，我们都表达出来了，而且活性跟商业的没有差别。
开始我们用pET载体在大肠杆菌各个菌株中都表达，可没有活性；过后认真分析，看文献，重新构建载体，表达出有活性的Taq酶。
努力吧！
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4楼2011-06-18 19:13:35
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