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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】原核表达去载体序列被翻译后该如何去掉
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】原核表达去载体序列被翻译后该如何去掉

我最近在研究原核表达，想知道如何设计成熟蛋白的原核表达引物，载体上通常自带起始密码子，原核表达时从起始密码子开始翻译，之后会翻译一段载体序列，这段氨基酸不是我的蛋白自身的序列，该如何去掉呢？希望做过原核表达的大侠多多帮忙，先谢谢了。
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1楼 2010-09-09 16:53:42
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bioxixi

木虫 (著名写手)
★
yujiaping1(金币+2):能给个QQ交流一下吗？ 2010-09-09 17:24:59
amisking(金币+1):鼓励一下 2010-09-09 22:10:29
C端的序列不是很重要吧，对蛋白的影响不大
如果想去掉就在你设计的序列前端加一个酶切位点，表达出来以后用蛋白酶切掉
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2楼2010-09-09 17:15:19
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)
yujiaping1(金币+2):如果带信号肽会不会影响呢？给个QQ交流一下吧 2010-09-09 17:26:02
看你用的什么载体啦？有些事带酶切位点的，不过即使切下去，也不一定能切干净的，有几个氨基酸应该影响不到的！
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一个人可以不成功，但不可以不成长！
3楼2010-09-09 17:18:08
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jia1012428

铜虫 (小有名气)
不用去掉，对酶活影响不大。
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4楼2010-09-09 21:56:10
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by jia1012428 at 2010-09-09 21:56:10:
不用去掉，对酶活影响不大。

那引物设计直接从想要的那个氨基酸的密码子开始吗？那样的引物会不会PCR不成功啊？
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5楼2010-09-09 22:10:02
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jia1012428

铜虫 (小有名气)
在你想用的两个酶切位点间加上目的序列，具体引物怎么设计多看看 相关资料吧！
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6楼2010-09-11 16:56:06
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