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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】原核表达去载体序列被翻译后该如何去掉

我最近在研究原核表达,想知道如何设计成熟蛋白的原核表达引物,载体上通常自带起始密码子,原核表达时从起始密码子开始翻译,之后会翻译一段载体序列,这段氨基酸不是我的蛋白自身的序列,该如何去掉呢?希望做过原核表达的大侠多多帮忙,先谢谢了。
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bioxixi

木虫 (著名写手)


yujiaping1(金币+2):能给个QQ交流一下吗? 2010-09-09 17:24:59
amisking(金币+1):鼓励一下 2010-09-09 22:10:29
C端的序列不是很重要吧,对蛋白的影响不大
如果想去掉就在你设计的序列前端加一个酶切位点,表达出来以后用蛋白酶切掉
2楼2010-09-09 17:15:19
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

yujiaping1(金币+2):如果带信号肽会不会影响呢?给个QQ交流一下吧 2010-09-09 17:26:02
看你用的什么载体啦?有些事带酶切位点的,不过即使切下去,也不一定能切干净的,有几个氨基酸应该影响不到的!
一个人可以不成功,但不可以不成长!
3楼2010-09-09 17:18:08
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jia1012428

铜虫 (小有名气)

不用去掉,对酶活影响不大。
4楼2010-09-09 21:56:10
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by jia1012428 at 2010-09-09 21:56:10:
不用去掉,对酶活影响不大。

那引物设计直接从想要的那个氨基酸的密码子开始吗?那样的引物会不会PCR不成功啊?
5楼2010-09-09 22:10:02
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jia1012428

铜虫 (小有名气)

在你想用的两个酶切位点间加上目的序列,具体引物怎么设计多看看 相关资料吧!
6楼2010-09-11 16:56:06
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