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龙开聪金虫 (小有名气)
贵是一种态度
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[求助]
含信号肽的序列能否在原核表达系统PET-32a中表达
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| 我的目的基因序列含有一段信号肽以及终止子，我设计引物的时候全部加上去的，准备用于原核表达，后来听说含信号肽在原核系统中不能表达，不敢确认，特来求助各位高人、前辈，我用于表达的基因加不加信号肽和终止子，以及它们的作用分别是什么啊？是不是加了终止子就不利于我蛋白的纯化啊？望高人解惑！！谢谢，谢谢 |
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2楼2011-11-17 13:32:34
xinyaolu
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
龙开聪(金币+2): 谢谢好心人，只剩两个金币了，全部给您了，我会尝试去掉信号肽和有信号肽的表达的，谢谢 2011-11-17 22:12:33
silicare(金币+5, BioEPI+1): 有价值 2011-11-18 10:54:55
龙开聪(金币+2): 谢谢好心人，只剩两个金币了，全部给您了，我会尝试去掉信号肽和有信号肽的表达的，谢谢 2011-11-17 22:12:33
silicare(金币+5, BioEPI+1): 有价值 2011-11-18 10:54:55
| 楼上对信号肽的描述，略有异议，信号肽中存在一段疏水性较强的区域，但并不表示带信号肽就不适合在原核系统中表达，信号肽的存在可能会将蛋白定位于细胞质之外，这样蛋白有活性的概率就会更高。虽然信号肽本身的密码子及二级结构可能会影响外源蛋白的表达，但楼上似乎将包涵体产生的概率估高了。包涵体的产生和很多因素有关：基因来源，宿主等等。。。。 楼主可以先尝试带天然信号肽表达，也可以去掉天然信号肽后在pelB信号肽引导下表达。终止子是的终止转录的，不用加上，很多载体上带有终止子。要想方便纯化可以带标签，载体上的或者自己合成在引物上，这方面的手段可以自己选择。 |
3楼2011-11-17 18:57:01
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4楼2011-11-17 19:52:54
xinyaolu
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5楼2011-11-17 21:08:52
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