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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】原核pET系统低温诱导表达菌体浓度太小怎么办？
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安氏

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】原核pET系统低温诱导表达菌体浓度太小怎么办？ 已有7人参与

最近在做质粒为pET-15b的大肠杆菌低温诱导表达，37℃摇菌2h后加入IPTG,诱导表达6h后，菌体OD只有1左右，有什么办法能提高菌体浓度呢？
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1楼 2010-05-30 09:52:52
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lstt09nk

铁杆木虫 (职业作家)

小堂
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):辛苦~~~ 2010-05-30 21:22:25
想要提高菌体浓度，你试试，在37度培养的时间再延长一些
还有可以适当的加大接种量呀~~
赞一下(2人) 回复此楼
坚持能无数次改变人生的风景，因为只要路是对的，就不怕远~~~
2楼2010-05-30 13:19:50
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dujing19841014

铁虫 (小有名气)
你还可以改变一下诱导温度
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3楼2010-05-30 16:53:53
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xing1789

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+3):正解 2010-05-30 21:22:46
PET系统诱导时候细菌的OD值是在0.6-0.8的  低温诱导一般都是要过夜的  
加入IPTG 一般是三到六个小时收获
我做IPTG诱导 到之后收获的时候OD值也就一点多 最多的时候能达到2
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4楼2010-05-30 17:20:07
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gene001

金虫 (正式写手)

就是个普通教师
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-30 21:22:54
1、优化培养基配方
2、温度最好在你允许范围内尽量高一些
3、最好是上个小型全自动发酵罐，那样效果会更好！
赞一下(2人) 回复此楼
大家共同交流、共同提高！！！
5楼2010-05-30 20:14:38
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ben1147

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
IPTG诱导以后细菌大量合成外源蛋白，本身的生长会受影响的，肯定不如不诱导的时候长得快。诱导时间过长有的菌体会崩溃。

菌体浓度低不是问题，关键看最后收集到的表达产物量，而且一般做诱导也就是零点几的OD，诱导剂加入的时机和诱导条件还跟产物的性质有关。
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6楼2010-05-30 22:47:33
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ningxi123456

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
原核表达诱导后不是看菌的浓度多少，菌浓度大了反而不好，在诱导时浓度过大，说明菌主要在繁殖，而用于加工蛋白就相对来说少了
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7楼2012-03-26 19:22:48
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26264716

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
2h太短了吧。。。我1/300接种，5-6h才到0.5左右，然后37度诱导4h
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苦，才是人生
8楼2013-05-07 13:15:52
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