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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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新虫 (正式写手)

[交流] 真核表达载体 原核 区别与扩增 已有6人参与

诸位:
交流两个问题:
1 原核表达载体和真核表达载体如何看图谱就能区分出来。据我观察,真核表达载体的复制起点好像是原核的,比如pBR322 ori
2 真核表达载体在真核细胞里,如哺乳动物细胞里,能扩增么?看了几个真核表达载体的图谱,没发现有真核细胞的复制起点。
期待诸位交流
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vir2008

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
256k: 回帖置顶 2012-04-23 18:13:53
很多真核表达载体(例如常用的pcDNA3.1)是可以在特定的真核细胞表达系统(COS等)中复制的。这类载体带有SV40 Ori,遇到细胞中的大T抗原后可以启动复制,拷贝数可以达到10^5以上。
区分原核与真核表达载体,看启动子就可以了。pCMV、pRSV都是常见的真核启动子。具体功能还得看说明书。
4楼2012-04-23 17:47:13
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普通回帖

啊Q精神

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流。 2012-04-20 18:07:16
区别主要在表达重组元件还有基因标记。promoter,terminater是宿主识别的的,真核可能还需要enhancer,重组到基因组中的话,需要介导重组的序列。筛选标记绝大多数不一样。
真核表达载体在宿主中以质粒形式存在的,可以复制。哺乳动物细胞里没有质粒,外源基因整合到基因组中的,所以不能扩增。由于整合多个位点而产生多拷贝。
2楼2012-04-20 16:09:30
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huguangdong

至尊木虫 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhaohq1209: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-22 20:12:48
不管是什么载体,最基本骨架是一样的,比如氨苄(卡纳)、复制起始位点等,因为这些载体都首先要保证能在原核中扩增,真核载体中一般至少含有一个真核启动子和转录终止信号,以及一个筛选标记,比如新霉素或者嘌呤霉素等,这比原核的复杂一点,要想彻底搞清楚这些问题,看看最基本的书本,比如基因工程原理吧。

[ Last edited by huguangdong on 2012-4-22 at 18:34 ]
3楼2012-04-22 18:33:06
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wjy90

新虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
5楼2012-11-05 22:05:24
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秦运杰223

铜虫 (正式写手)

学习一下,谢谢!
从前有一种鸟一直飞。。
6楼2012-11-09 19:32:15
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wjy90

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
最近做双酶切,回收产物效果很好,T4连接酶过夜连接,转化后菌不长,重复了好多次,结果还是不理想,请教高人的指教!谢谢
7楼2013-01-28 16:59:36
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wjy90

新虫 (初入文坛)

请指教!
8楼2013-01-28 17:07:02
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yumeizhang

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本人也在学习这些,不太懂
9楼2013-09-09 17:29:12
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