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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】原核表达载体pGEX-4T-1对应的表达菌株 已有5人参与

做原核表达的过程中，用pGEX-4T-1在BL21（DE3）中没有诱导出目的蛋白，更换Rosetta系列的表达菌株是否与其Ptac的启动子相兼容。Rosetta系列的表达菌株是否提供T7 RNA聚合酶？
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1楼 2010-05-04 21:31:38
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ivyxiao

金虫 (正式写手)
顶下，同样关注此问题
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2楼2010-07-01 17:17:02
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yangjunzju

木虫 (正式写手)
★
lstt09nk(金币+1):欢迎常来~~ 2010-07-19 17:51:19
dfl204(金币+2): 2010-07-20 17:13:38
Rosetta系列的表达菌株可以提供T7 RNA聚合酶，它能表达PET系列载体上的外源基因。。。pGEX系列载体上的外源基因不需要T7 RNA聚合酶，普通的大肠杆菌经IPTG诱导即可表达。。。
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3楼2010-07-19 16:10:17
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jasco

木虫 (正式写手)
楼上正解，
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4楼2010-07-19 16:44:11
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by yangjunzju at 2010-07-19 16:10:17:
Rosetta系列的表达菌株可以提供T7 RNA聚合酶，它能表达PET系列载体上的外源基因。。。pGEX系列载体上的外源基因不需要T7 RNA聚合酶，普通的大肠杆菌经IPTG诱导即可表达。。。

pGEX系列载体上的启动子是Ptac，具体来说是什么意思？Trp与Lac操纵子的复合体？

谢谢答案！
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5楼2010-07-20 17:15:39
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yangjunzju

木虫 (正式写手)
dfl204(金币+3): 2010-07-20 18:13:20
引用回帖:
Originally posted by dfl204 at 2010-07-20 17:15:39:



pGEX系列载体上的启动子是Ptac，具体来说是什么意思？Trp与Lac操纵子的复合体？

谢谢答案！

Tac启动子是一组由Lac和trp启动子人工构建的杂合启动子，受Lac阻遏蛋白的负调节，它的启动能力比Lac和trp都强。其中Tac 1是由Trp启动子的－35区加上一个合成的46 bp DNA片段(包括Pribnow 盒)和Lac操纵基因构成，Tac 12是由Trp的启动子-35区和Lac启动子的-10区，加上Lac操纵子中的操纵基因部分和SD序列融合而成
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6楼2010-07-20 17:49:15
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qzj2011

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by yangjunzju at 2010-07-19 16:10:17:
Rosetta系列的表达菌株可以提供T7 RNA聚合酶，它能表达PET系列载体上的外源基因。。。pGEX系列载体上的外源基因不需要T7 RNA聚合酶，普通的大肠杆菌经IPTG诱导即可表达。。。

请问普通的大肠杆菌经IPTG诱导即可表达，普通是指哪些？能不能具体说一两个？再者楼主用BL21又不能诱导pGEX-4T构建的质粒，那BL21是不是比较特写。谢谢！
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7楼2011-10-20 20:25:02
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