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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 真核表达载体 原核 区别与扩增
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256k

新虫 (正式写手)

[交流] 真核表达载体 原核 区别与扩增 已有6人参与

诸位：
交流两个问题：
1 原核表达载体和真核表达载体如何看图谱就能区分出来。据我观察，真核表达载体的复制起点好像是原核的，比如pBR322 ori
2 真核表达载体在真核细胞里，如哺乳动物细胞里，能扩增么？看了几个真核表达载体的图谱，没发现有真核细胞的复制起点。
期待诸位交流
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wjy90

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1楼 2012-04-20 15:02:32
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wjy90

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
最近做双酶切，回收产物效果很好，T4连接酶过夜连接，转化后菌不长，重复了好多次，结果还是不理想，请教高人的指教！谢谢
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7楼2013-01-28 16:59:36
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啊Q精神

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流。 2012-04-20 18:07:16
区别主要在表达重组元件还有基因标记。promoter，terminater是宿主识别的的,真核可能还需要enhancer,重组到基因组中的话，需要介导重组的序列。筛选标记绝大多数不一样。
真核表达载体在宿主中以质粒形式存在的，可以复制。哺乳动物细胞里没有质粒，外源基因整合到基因组中的，所以不能扩增。由于整合多个位点而产生多拷贝。
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2楼2012-04-20 16:09:30
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huguangdong

至尊木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhaohq1209: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-22 20:12:48
不管是什么载体，最基本骨架是一样的，比如氨苄（卡纳）、复制起始位点等，因为这些载体都首先要保证能在原核中扩增，真核载体中一般至少含有一个真核启动子和转录终止信号，以及一个筛选标记，比如新霉素或者嘌呤霉素等，这比原核的复杂一点，要想彻底搞清楚这些问题，看看最基本的书本，比如基因工程原理吧。

[ Last edited by huguangdong on 2012-4-22 at 18:34 ]
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3楼2012-04-22 18:33:06
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vir2008

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
256k: 回帖置顶 2012-04-23 18:13:53
很多真核表达载体（例如常用的pcDNA3.1）是可以在特定的真核细胞表达系统（COS等）中复制的。这类载体带有SV40 Ori，遇到细胞中的大T抗原后可以启动复制，拷贝数可以达到10^5以上。
区分原核与真核表达载体，看启动子就可以了。pCMV、pRSV都是常见的真核启动子。具体功能还得看说明书。
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4楼2012-04-23 17:47:13
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