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shijie2280

新虫 (初入文坛)

[求助] 原核表达大量出不来结果

我表达结核杆菌的一个基因,虽然小量表达时有明显调大,但为什么大量表达时总表达不出来呢?求高手指点
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用的什么载体,pet28a吗? 大量表达和小量表达时用的诱导条件是否一致,IPTG、温度、时间等
科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
2楼2012-12-28 11:15:12
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shijie2280

新虫 (初入文坛)

pGEX4T-1,带GST标签的,所有的都一样
3楼2012-12-28 11:56:05
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molecula

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

如果是载体表达的话,大量表达的情况下有时候会出现堵塞效应。
换句话说,你挑的量太大了,以至于这个基因表达的路线被堵塞了,转而进行了其他结构性基因的表达了。
你试一试调低一点表达。看看是不是能做出来。
再就是菌浓度太高也会抑制表达。
你试一下不要培养太久。
4楼2013-01-04 12:48:51
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

我也是pGEX-4T-1的融合表达,没有碰到楼主所说的这种情况,首先你可以从小量诱导下手,先优化一下小量诱导的条件,使表达量最大化,然后用这个条件再去做做大量表达试试看,一般少量表达可以大量表达是不会出什么问题的.
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
5楼2013-01-04 14:14:21
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