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zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

引用回帖:
: Originally posted by whb21 at 2012-02-08 14:51:52:
IPTG诱导不出来目标蛋白很有可能是质粒载体构建出了问题,不知道你IPTG加入量多少,但个人觉得IPTG诱导能力超强,只要加进去就会诱导出蛋白,SDS-PAGE上就会有条带。建议你从上游查起。祝好运

我的载体为T7lac,IPTG又到浓度为1mM。上游检查无问题啊
无善无恶心之体
11楼2012-02-10 09:49:23
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zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

引用回帖:
: Originally posted by cnliu51 at 2012-02-09 10:55:08:
这种问题我曾经遇到过,反复构建了两次表达载体,均没有表达出来。经过核实,认为问题出在基因的密码子使用偏好上,后来我们按照大肠菌的密码使用偏好设计了基因,全人工合成了该基因,结果就表达出来了。希望我的 ...

应该花了很长时间吧,我的时间可能不够
无善无恶心之体
12楼2012-02-10 09:50:14
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whb21

木虫 (著名写手)

还有可以看看阅读框架和His-Tag有没有问题,要是没问题的话就真不好说了
13楼2012-02-12 08:27:23
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xiuluokemo

铜虫 (初入文坛)

你用什么酶连接的。测序的结果比对一下酶切连接时有没有对载体上的核糖体识别位点构成破坏。建议用合适的酶切位点,如果没问题就重新再连接一次,怀疑核糖体识别位点遭到破坏。
或者严重的是你这个东西大量在大肠杆菌体内表达是由毒性的,那你就悲剧了.
没有做不了的事,只有下不了的决心
14楼2012-02-24 21:11:23
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