| 查看: 2389 | 回复: 13 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
zhiqiang5070木虫 (正式写手)
|
[求助]
[size=5]外源基因原核表达遭遇种种瓶颈，求各位高手近来解答[/size]
|
|
|
我做的是交替氧化酶在大肠杆菌里的表达。实验步骤如下：将RNA反转录成DNA，通过action引物验证没问题，通过特异引物PCR，回收纯化，连接到T载体，成功转化。菌液送测，无问题。提质粒，酶切，回收纯化，连接到酶切纯化后的ｐET28a上。然后转化进BL21中。送测，没问题，用IPTG诱导，可是又到不出来，SDS-PAGE老是无目的带。 后面又重提T载体质粒开始做，可是做了2次都没有转化BL21成功。对连接产物做凝胶成像符合预期。 这是肿么了？哪里出问题了？ 打算重头开始做，又找不到问题所在，害怕徒劳无功啊。大家帮忙提建议啦，谢谢。。。。本人小虫，金币不多，还望见谅。 PS：我的目的片段5‘端有两个ATG，内切酶SacI 和XhoI ，两者相距２１ｂｐ。 |
回复此楼» 猜你喜欢
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有121人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 实验到了瓶颈，求高手帮助。
已经有12人回复
- 关于SacI和XhoI酶切位点？
已经有7人回复
- 原核表达重组表达载体的连问题
已经有14人回复
- pET28a载体蛋白表达为包涵体
已经有5人回复
- PCR产物纯化后酶切，连接
已经有28人回复
- 原核表达大量出不来结果
已经有4人回复
- 原核基因表达可否把表达盒串联
已经有4人回复
- 原核表达重组质粒提取
已经有7人回复
- T7载体的IPTG诱导
已经有10人回复
- 请教各位高人，基因克隆表达的流程是什么？
已经有8人回复
- 急，基因池筛选出的多态性引物为什么用构建池的单株验证就重复不出多态性了？
已经有4人回复
- 含信号肽的序列能否在原核表达系统PET-32a中表达
已经有7人回复
- 多个亚基蛋白 ORF串联表达
已经有9人回复
- 原核表达蛋白诱导不出来
已经有16人回复
- 关于原核表达中，IPTG,KAN等的配制和最终工作浓度问题！！！
已经有16人回复
- 我好像遇到了瓶颈期
已经有27人回复
- 外源基因在酵母中表达
已经有7人回复
- 做了热重，如何通过得到的数据画热重曲线图，求高手解答！
已经有11人回复
- 关于外源基因导入的想法
已经有4人回复
- 【求助/交流】请问大家：将外源DNA与载体连接的体系怎么确定啊？
已经有7人回复
- 【求助/交流】请教关于毕赤酵母表达外源基因
已经有5人回复
- 【求助/交流】原核表达羊基因，cDNA长度约为3kb，基因为一种有活性的酶
已经有15人回复
- 【求助/交流】急！关于外源基因在丝状真菌中的融合表达
已经有8人回复
- 【求助/交流】枯草中表达外源基因，有蛋白，但是没有酶活，是什么原因？
已经有4人回复
- 【分享】Tinker 5出来啦！
已经有5人回复
- [求助]原核表达如何减少包涵体
已经有23人回复
zhiqiang5070
木虫 (正式写手)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 2711.4
- 散金: 66
- 红花: 1
- 帖子: 459
- 在线: 117小时
- 虫号: 743352
- 注册: 2009-04-08
- 性别: GG
- 专业: 抗肿瘤药物药理
4楼2012-02-07 14:20:04
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
2楼2012-02-07 11:30:20
lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
- MolEPI: 58
- 应助: 388 (硕士)
- 贵宾: 0.238
- 金币: 17138.7
- 红花: 43
- 帖子: 2251
- 在线: 712.4小时
- 虫号: 111074
- 注册: 2005-11-20
- 专业: 生物化学
3楼2012-02-07 12:54:25
5楼2012-02-08 08:26:58
20