应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请问大家：将外源DNA与载体连接的体系怎么确定啊？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
81/1返回列表
查看: 2145  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

worm2010

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请问大家：将外源DNA与载体连接的体系怎么确定啊？ 已有5人参与

将外源DNA与载体连接的体系怎么确定啊？我用TAKARA公司产的T4DNA连接酶，但是说明书上写的不太明确，什么DNA片段0.3pmol，载体DNA0.03pmol，这到底该怎么确定加多少μl？帮我出出主意，谢谢大家！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-03-02 08:44:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丁丁猫

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
依我个人经验来说体系越小越好，我一般做5微升体系
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-03-02 08:56:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

worm2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 丁丁猫 at 2011-03-02 08:56:39:
依我个人经验来说体系越小越好，我一般做5微升体系

能详细说说吗？
还有为什么体系越小越好呢？
赞一下 回复此楼
3楼2011-03-02 09:04:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

spiderboy

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
恩。同意沙发。。体系越小越好。一般5-10微升。。然后关键就是载体和外源DNA的比例，一般他们的分子数比例为1:3。。。所以你要对DNA和载体进行定量。。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-03-02 09:04:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

worm2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by spiderboy at 2011-03-02 09:04:27:
恩。同意沙发。。体系越小越好。一般5-10微升。。然后关键就是载体和外源DNA的比例，一般他们的分子数比例为1:3。。。所以你要对DNA和载体进行定量。。

这个DNA和载体进行定量是怎么个定量法呀？
赞一下 回复此楼
5楼2011-03-02 09:07:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

walker2898

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
翱宇(金币+1): 谢谢交流 2011-03-02 12:29:00
体系一般用10微升体系，具体构成得根据你的DNA和载体的浓度，测浓度可以电泳进行粗估，根据条带的亮度和marker的亮度进行比对确定浓度，一般载体和DNA的浓度比在1:3-1:8都可以，宝生物的一般T4DNA连接酶最好16度过夜连接，转化时加5微升即可。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2011-03-02 09:43:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1): 感谢交流 2011-03-02 18:03:09
...比如我用的Invitrogen的试剂盒，他给出的最佳mol比是10：1，然后你你根据你片段和载体的核苷酸数，算出你要加的ng数（根据说明书里的公式），再根据你片段的浓度算出体积数
赞一下(2人) 回复此楼
生活是美好的
7楼2011-03-02 12:48:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

spiderboy

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by worm2010 at 2011-03-02 09:07:56:
这个DNA和载体进行定量是怎么个定量法呀？

跑电泳。加上定量MARKER一起跑。。
然后拍照。。用专门的分析软件分析，如QUANTITY ONE
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-03-02 18:52:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 worm2010 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工301分求调剂院校 +9 刺痛jk 2026-04-06 10/500 2026-04-06 08:12 by melodiousnow
[考研] 0703化学调剂325分 +10 15771691647 2026-04-04 10/500 2026-04-06 06:31 by houyaoxu
[考研] 338求调剂 +3 我想上岸ii 2026-04-05 3/150 2026-04-05 19:59 by nepu_uu
[考研] 0703化学321分求调剂 +17 三dd. 2026-03-30 18/900 2026-04-05 18:07 by 蓝云思雨
[考研] 数一英一274机械调剂 +5 星陨流霞 2026-04-04 6/300 2026-04-05 11:38 by arrow8852
[考研] 311分 22408 求调剂 +3 bing_bot 2026-04-03 3/150 2026-04-05 00:43 by chongya
[考研] 298求调剂 +5 zzz，，r 2026-04-02 8/400 2026-04-04 19:55 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂 +3 ffyyu 2026-04-02 3/150 2026-04-04 19:03 by 蓝云思雨
[考研] 295求调剂 +3 尚偌呀 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:23 by zhq0425
[考研] 调剂 +5 asdasdassda 2026-04-03 6/300 2026-04-03 20:27 by 岸上的一条鱼
[考研] 336求调剂 +8 kiyy 2026-04-01 8/400 2026-04-03 19:41 by lijunpoly
[考研] 303求调剂 +9 DLkz1314. 2026-03-30 9/450 2026-04-03 18:34 by ls刘帅
[考研] 求调剂 +9 akdhjs 2026-03-31 11/550 2026-04-03 13:32 by akdhjs
[考研] 283求调剂 +3 jiouuu 2026-04-03 4/200 2026-04-03 13:28 by jiouuu
[考研] 319求调剂 +18 太容易1018 2026-04-01 18/900 2026-04-03 11:18 by linyelide
[考研] 309求调剂 +14 呆菇不是戴夫 2026-04-02 14/700 2026-04-03 09:42 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂22408 288分 +5 new382 2026-04-02 5/250 2026-04-03 09:13 by 醉在风里
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-03-30 13/650 2026-04-01 17:00 by 七度不信任
[考研] 考研材料工程351分调剂 +5 整个好的 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:36 by topgun2009
[考研] 一志愿中海洋320化学工程与技术学硕求调剂 +8 披星河 2026-03-30 8/400 2026-03-31 08:53 by lbsjt
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭