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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】急！关于外源基因在丝状真菌中的融合表达
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melodyxin

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】急！关于外源基因在丝状真菌中的融合表达 已有2人参与

如题，看了一些文献，发现外源基因往往采用融合表达的策略。而且许多研究往往会选用Pcbh1强启动子，后面加上某个同源基因（比如木聚糖酶基因XynA）的信号肽和部分前导序列（CBD和linker序列），然后再连接外源基因与之融合表达。

我想请教一下各位，关于这里载体构建方式，木聚糖酶的信号肽ss，可否换成Pcbh1下游的ss呢？也就是说，融合表达策略中选用的信号肽是否一定要求是融合序列的信号肽，而不能替换成启动子下游的信号肽？

亦即：

Pcbh1-XynA（ss-CBD-linker）-目的基因-Tcbh1
能否换成：
Pcbh1-ss-XynA（CBD-linker）-目的基因-Tcbh1

[ Last edited by melodyxin on 2010-6-19 at 11:35 ]
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1楼 2010-06-18 17:47:38
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melodyxin

铜虫 (小有名气)
我再说明一下，主要的问题在于信号肽。
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2楼2010-06-18 17:48:02
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melodyxin

铜虫 (小有名气)
很需要大家的帮助！求交流啊
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3楼2010-06-18 20:15:42
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anlewo7777

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lmzxcom1(金币+1):积极交流 2010-06-19 09:21:33
我认为只看表达的话可能可以,但好多蛋白加信号肽是为了表达之后的不被内部降解和利于分泌出菌体,单丛这个启动子信号肽能否用来说,我觉得要看它是不是宿主来源的启动子,否则宿主不能识别外源信号肽,还是起不到对融合蛋白的保护和帮助分泌作用.
了解不多,仅供参考!
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4楼2010-06-19 08:04:17
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melodyxin

铜虫 (小有名气)
嗯，我个人觉得启动子没问题，我只是对于同样是宿主来源的信号肽存有疑问。在融合表达时，应该选用启动子下游的信号肽，还是融合序列上游的信号肽？
这两者都是宿主来源。
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5楼2010-06-19 11:34:27
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anlewo7777

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-06-20 11:29:14
我不知道你的启动子是调控什么蛋白的表达的，如果你有资料，可以比较一下这两个蛋白的量、稳定性和分泌特性选择一下，个人认为用融合序列的保险一些，毕竟那是生物里原来的序列。这样做如果不成，那就可能是启动子和之后序列的连接有问题，这在另一个方案里也会有，用你倾向的方案，如果不成，你就不知道是什么原因。
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6楼2010-06-20 08:17:47
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melodyxin

铜虫 (小有名气)
dhd997:最好引用回复，不然你咨询的人看不到。 2010-06-20 11:10:07
嗯，这个启动子是丝状真菌里常用的强启动子，其分泌的蛋白占里氏木霉分泌总蛋白的60%以上。
对了，我也倾向于方案1，用融合序列同源的信号肽。

另外我想再问一下，真菌的信号肽功能差别会很大吗？
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7楼2010-06-20 10:41:43
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anlewo7777

木虫 (正式写手)
这个没有研究过,不过序列不一样应该是有区别的吧
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8楼2010-06-21 08:33:27
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melodyxin

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by anlewo7777 at 2010-06-21 08:33:27:
这个没有研究过,不过序列不一样应该是有区别的吧

哦！这样，好的，那我还是试试看。
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9楼2010-06-21 11:53:05
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