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嘟噜金虫 (小有名气)
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[求助]
丝状真菌菌丝体破碎细胞壁，不要胞内酶，求助最简单的实验方法。。。
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| 如题，想用有机溶剂乙酸乙酯萃取丝状真菌菌丝体内的小分子化合物分子量低于500，不要胞内酶，想求助最简单实用的具体实验方法，超声波破碎法就不要说了，实验室没有超声波破碎仪，高压匀浆法也绕行吧，也没有仪器。其实我就是想知道用什么有机溶剂浸泡可以裂解真菌细胞壁，具体比例，浸泡时间等，如果是反复冻融法，想问问反复冻融具体几次啊，想找个最简单而且实用的。。。。。。 |
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jiyannangxj
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【答案】应助回帖
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1、高速组织捣碎：将材料配成稀糊状液，放置于筒内约1/3体积，盖紧筒盖，将调速器先拨至最慢处，开动开关后，逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等。 2、玻璃匀浆器匀浆：先将剪碎的组织置于管中，再套入研杆来回研磨，上下移动，即可将细胞研碎，此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高，适用于量少和动物脏器组织。 3、超声波处理法：用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂，此法多适用于微生物材料，用大肠杆菌制备各种酶，常选用50-100毫克菌体/毫升浓度，在1KG至10KG频率下处理10-15分钟，此法的缺点是在处理过程会产生大量的热，应采取相应降温措施。对超声波敏感和核酸应慎用。 4、反复冻融法：将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。 5、化学处理法：有些动物细胞，例如肿瘤细胞可采用十二烷基磺酸钠（SDS）、去氧胆酸钠等细胞膜破坏，细菌细胞壁较厚，可采用溶菌酶处理效果更好。 无论用哪一种方法破碎组织细胞，都会使细胞内蛋白质或核酸水解酶释放到溶液中，使大分子生物降解，导致天然物质量的减少，加入二异丙基氟磷酸（DFP）可以抑制或减慢自溶作用；加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性，加入苯甲磺酰氟化物（PMSF）也能清除蛋白水解酥活力，但不是全部，还可通过选择pH、温度或离子强度等，使这些条件都要适合于目的物质的提取。 |
10楼2012-02-27 19:22:07
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