24小时热门版块排行榜    

查看: 982  |  回复: 3

魂牵江南

木虫 (小有名气)

[求助] 关于胞内酶表达

我的酶是胞内酶,在大肠里表达,IPTG诱导之后,超声波破碎,之后测粗酶液的酶活,想请教各位大神,如果破碎不能破清,也就是破的不完全,会影响我最后的酶活吗?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

不在堕落中慢慢沉沦
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dhmdddd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
魂牵江南(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-08 02:06:55
你的超声条件是否可以使你的菌体破壁完全,这个可以通过SDS-PAGE来看.如果你超声的条件合适,破壁完全,但是破壁之后离心仍然是浑浊的,那就可能是你的蛋白表达在沉淀中的比较多,你就需要把你表达的条件,如温度,IPTG浓度等等改变一下,重新做表达.
上班族,学习ing……
2楼2013-05-07 21:21:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

魂牵江南

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dhmdddd at 2013-05-07 21:21:05
你的超声条件是否可以使你的菌体破壁完全,这个可以通过SDS-PAGE来看.如果你超声的条件合适,破壁完全,但是破壁之后离心仍然是浑浊的,那就可能是你的蛋白表达在沉淀中的比较多,你就需要把你表达的条件,如温度,IPTG浓度 ...

跑了SDS-PAGE,胞内沉淀中出现包涵体,上清条带不粗,测酶活大概130U,今天做实验我发现,破1ml体系,0D600=3时可以破清,而=5时破的不好,我想问这种情况所得的粗酶液的酶活有没有影响
不在堕落中慢慢沉沦
3楼2013-05-07 22:45:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dhmdddd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 魂牵江南 at 2013-05-07 22:45:38
跑了SDS-PAGE,胞内沉淀中出现包涵体,上清条带不粗,测酶活大概130U,今天做实验我发现,破1ml体系,0D600=3时可以破清,而=5时破的不好,我想问这种情况所得的粗酶液的酶活有没有影响...

原来我们实验室做过不同浓度下不同破壁条件对酶活力的影响,最终的结论是破壁效果最好的,酶活不一定最高.我觉得你最终的破壁条件还是要看你最终的实验目的吧,要是想得到较高的酶活,那就不同条件都试下,找到最优的破壁条件,要是不同的转化子做对比,那就保证做对比的破壁条件一致就好.
上班族,学习ing……
4楼2013-05-13 21:27:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 魂牵江南 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +4 瞬息宇宙 2026-08-15 4/200 2026-08-19 16:23 by allmydream
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +8 ziyangfang 2026-08-19 9/450 2026-08-19 13:08 by blacksandy
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +8 kkkl_v 2026-08-19 8/400 2026-08-19 12:34 by Vivilian
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +52 医学老男孩 2026-08-13 115/5750 2026-08-19 12:09 by 医学老男孩
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +10 基诺咪客 2026-08-17 14/700 2026-08-19 10:34 by 基诺咪客
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +8 启萌科技 2026-08-12 30/1500 2026-08-19 10:22 by 启萌科技
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +4 Tide man 2026-08-12 5/250 2026-08-19 07:41 by 201120518022
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
信息提示
请填处理意见