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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 关于胞内酶表达
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魂牵江南

木虫 (小有名气)

[求助] 关于胞内酶表达

我的酶是胞内酶，在大肠里表达，IPTG诱导之后，超声波破碎，之后测粗酶液的酶活，想请教各位大神，如果破碎不能破清，也就是破的不完全，会影响我最后的酶活吗？
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不在堕落中慢慢沉沦
1楼 2013-05-07 18:58:25
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魂牵江南

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dhmdddd at 2013-05-07 21:21:05
你的超声条件是否可以使你的菌体破壁完全,这个可以通过SDS-PAGE来看.如果你超声的条件合适,破壁完全,但是破壁之后离心仍然是浑浊的,那就可能是你的蛋白表达在沉淀中的比较多,你就需要把你表达的条件,如温度,IPTG浓度 ...

跑了SDS-PAGE,胞内沉淀中出现包涵体，上清条带不粗，测酶活大概130U，今天做实验我发现，破1ml体系，0D600=3时可以破清，而=5时破的不好，我想问这种情况所得的粗酶液的酶活有没有影响
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不在堕落中慢慢沉沦
3楼2013-05-07 22:45:38
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
魂牵江南(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-08 02:06:55
你的超声条件是否可以使你的菌体破壁完全,这个可以通过SDS-PAGE来看.如果你超声的条件合适,破壁完全,但是破壁之后离心仍然是浑浊的,那就可能是你的蛋白表达在沉淀中的比较多,你就需要把你表达的条件,如温度,IPTG浓度等等改变一下,重新做表达.
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上班族，学习ing……
2楼2013-05-07 21:21:05
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 魂牵江南 at 2013-05-07 22:45:38
跑了SDS-PAGE,胞内沉淀中出现包涵体，上清条带不粗，测酶活大概130U，今天做实验我发现，破1ml体系，0D600=3时可以破清，而=5时破的不好，我想问这种情况所得的粗酶液的酶活有没有影响...

原来我们实验室做过不同浓度下不同破壁条件对酶活力的影响,最终的结论是破壁效果最好的,酶活不一定最高.我觉得你最终的破壁条件还是要看你最终的实验目的吧,要是想得到较高的酶活,那就不同条件都试下,找到最优的破壁条件,要是不同的转化子做对比,那就保证做对比的破壁条件一致就好.
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上班族，学习ing……
4楼2013-05-13 21:27:34
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