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shiliu2011木虫 (正式写手)
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酶活以每毫克蛋白每分钟生成产物的微摩尔数表示？？
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| 各位大侠，酶活以每毫克蛋白每分钟生成产物的微摩尔数表示，我现在已经得到了产物在某一od下的吸光值，根据这句话如何计算酶活啊？ |
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shiliu2011
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shiliu2011: 回帖置顶 2012-04-05 22:02:52
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补充一下： 现在测定一种胞内酶的活性，根据查到的试验方法，将反应混合物在25℃水浴中反应30 min,每5 min取样一次。反应产物顺,顺—己二烯二酸的吸收峰在A260处。A260峰值的增加表示产物顺,顺—己二烯二酸的积累。酶活以每毫克蛋白每分钟生成产物的微摩尔数表示。(λ = 260 nm, ε = 25.6 mM-1cm-1) 我现在得到了反应30 min,每5 min测定的OD260 ，怎么计算酶活呢？ 酶活以每毫克蛋白每分钟生成产物的微摩尔数表示。这句话不理解啊。。。。不会算啊 请各位达人赐教啊! |
2楼2012-04-05 17:17:17
zxc6884
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【答案】应助回帖
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shiliu2011: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢您！ 2012-04-05 21:52:51
shiliu2011: 回帖置顶 2012-04-05 22:03:09
shiliu2011: 金币+3, ★★★★★最佳答案, 再次感谢哈! 2012-04-08 10:52:35
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1、需要定义酶活力单位：在一定条件下，每分钟催化生产1微摩尔产物为一个酶活单位。一般以U表示。也可以直接用μmol表示。 2、需要知道反应体系中蛋白浓度才可以计算你说的酶活：每毫克蛋白每分钟生成产物的微摩尔数表示。否则只能计算单位体积中的酶活力。前者以U/mg表示，是比活力的意思，一定程度上反映你酶的特性、纯度。后者只是单位体积力的活力，一定程度上反映酶浓度。 3、测得吸光值，并已知 ε 、b。就可以计算出产物生成速率。Δc=c/t=ΔA/(εb)。b=1cm,ε = 25.6 mM-1cm-1,ΔA=每分钟吸光值的变化（需要线性）。 4、你需要的活力（也就是比活力）：U/mg=Δc/c，c=反应体系中的蛋白浓度（注意是反应体系）。注意单位同一就行了。 |
6楼2012-04-05 20:56:40
zxc6884
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5楼2012-04-05 18:13:09
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