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shiliu2011

木虫 (正式写手)

[求助] 酶活以每毫克蛋白每分钟生成产物的微摩尔数表示??

各位大侠,酶活以每毫克蛋白每分钟生成产物的微摩尔数表示,我现在已经得到了产物在某一od下的吸光值,根据这句话如何计算酶活啊?
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)

shiliu2011: 回帖置顶 2012-04-07 11:59:52
引用回帖:
9楼: Originally posted by shiliu2011 at 2012-04-05 21:58:14:
还有一点不明白
U/mg=Δc/c,c=反应体系中的蛋白浓度(注意是反应体系)
比如,我的初始蛋白浓度1ug/ul 体系里是稀释10倍的蛋白液加了100微升,总反应体系是500微升,那么c=反应体系中的蛋白浓度(注意是反应 ...

1μg/μl稀释10倍就是0.1μg/μl,你是取100μl 0.1μg/μl的样品加入400μl里吧,总反应体积就是500μl是吧。那c=0.1*100/500=0.02μg/μl=0.02mg/ml,实际参与反应的蛋白浓度就是0.02mg/ml
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12楼2012-04-06 23:36:43
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shiliu2011

木虫 (正式写手)

shiliu2011: 回帖置顶 2012-04-05 22:02:52
补充一下:
现在测定一种胞内酶的活性,根据查到的试验方法,将反应混合物在25℃水浴中反应30 min,每5 min取样一次。反应产物顺,顺—己二烯二酸的吸收峰在A260处。A260峰值的增加表示产物顺,顺—己二烯二酸的积累。酶活以每毫克蛋白每分钟生成产物的微摩尔数表示。(λ = 260 nm, ε = 25.6 mM-1cm-1)
     我现在得到了反应30 min,每5 min测定的OD260 ,怎么计算酶活呢?
     酶活以每毫克蛋白每分钟生成产物的微摩尔数表示。这句话不理解啊。。。。不会算啊
     请各位达人赐教啊!
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2楼2012-04-05 17:17:17
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shiliu2011

木虫 (正式写手)

请高人指点啊!捣鼓了一天了还没整明白。。。
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3楼2012-04-05 17:18:55
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shiliu2011

木虫 (正式写手)

是否有什么公式?网上查到:c=A/(εb),式中A可直接测定,b是已知的,ε可取蛋白质的消光系数,即可求出c(浓度,摩尔/升).
浓度算出来了 酶活咋整?还是不会。。。
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4楼2012-04-05 18:11:33
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