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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酶活以每毫克蛋白每分钟生成产物的微摩尔数表示？？
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shiliu2011

木虫 (正式写手)

[求助] 酶活以每毫克蛋白每分钟生成产物的微摩尔数表示？？

各位大侠，酶活以每毫克蛋白每分钟生成产物的微摩尔数表示，我现在已经得到了产物在某一od下的吸光值，根据这句话如何计算酶活啊？
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1楼 2012-04-05 17:15:19
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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shiliu2011: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢您！ 2012-04-05 21:52:51
shiliu2011: 回帖置顶 2012-04-05 22:03:09
shiliu2011: 金币+3, ★★★★★最佳答案, 再次感谢哈! 2012-04-08 10:52:35
1、需要定义酶活力单位：在一定条件下，每分钟催化生产1微摩尔产物为一个酶活单位。一般以U表示。也可以直接用μmol表示。
2、需要知道反应体系中蛋白浓度才可以计算你说的酶活：每毫克蛋白每分钟生成产物的微摩尔数表示。否则只能计算单位体积中的酶活力。前者以U/mg表示，是比活力的意思，一定程度上反映你酶的特性、纯度。后者只是单位体积力的活力，一定程度上反映酶浓度。
3、测得吸光值，并已知 ε 、b。就可以计算出产物生成速率。Δc=c/t=ΔA/(εb)。b=1cm,ε = 25.6 mM-1cm-1,ΔA=每分钟吸光值的变化（需要线性）。
4、你需要的活力（也就是比活力）：U/mg=Δc/c，c=反应体系中的蛋白浓度（注意是反应体系）。注意单位同一就行了。
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6楼2012-04-05 20:56:40
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)
shiliu2011: 回帖置顶 2012-04-07 11:59:52
引用回帖:
9楼: Originally posted by shiliu2011 at 2012-04-05 21:58:14:
还有一点不明白
U/mg=Δc/c，c=反应体系中的蛋白浓度（注意是反应体系）
比如，我的初始蛋白浓度1ug/ul 体系里是稀释10倍的蛋白液加了100微升，总反应体系是500微升，那么c=反应体系中的蛋白浓度（注意是反应 ...

1μg/μl稀释10倍就是0.1μg/μl，你是取100μl 0.1μg/μl的样品加入400μl里吧，总反应体积就是500μl是吧。那c=0.1*100/500=0.02μg/μl=0.02mg/ml，实际参与反应的蛋白浓度就是0.02mg/ml
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12楼2012-04-06 23:36:43
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shiliu2011

木虫 (正式写手)
shiliu2011: 回帖置顶 2012-04-05 22:02:52
补充一下：
现在测定一种胞内酶的活性，根据查到的试验方法，将反应混合物在25℃水浴中反应30 min,每5 min取样一次。反应产物顺,顺—己二烯二酸的吸收峰在A260处。A260峰值的增加表示产物顺,顺—己二烯二酸的积累。酶活以每毫克蛋白每分钟生成产物的微摩尔数表示。(λ = 260 nm, ε = 25.6 mM-1cm-1)
     我现在得到了反应30 min,每5 min测定的OD260 ，怎么计算酶活呢？
     酶活以每毫克蛋白每分钟生成产物的微摩尔数表示。这句话不理解啊。。。。不会算啊
     请各位达人赐教啊!
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2楼2012-04-05 17:17:17
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shiliu2011

木虫 (正式写手)
请高人指点啊！捣鼓了一天了还没整明白。。。
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3楼2012-04-05 17:18:55
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shiliu2011

木虫 (正式写手)
是否有什么公式？网上查到：c=A/(εb),式中A可直接测定,b是已知的,ε可取蛋白质的消光系数,即可求出c(浓度,摩尔/升).
浓度算出来了 酶活咋整？还是不会。。。
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4楼2012-04-05 18:11:33
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shiliu2011

木虫 (正式写手)
是不是要先定义一个酶活单位？？
咋算啊？呃。。。数学 物理不好的孩子伤不起。。。
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5楼2012-04-05 18:13:09
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)
有个别字打错了，不好意思。
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7楼2012-04-05 20:58:22
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starseacow

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【答案】应助回帖

★ ★
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shiliu2011: 金币+2, ★★★很有帮助, 哦，真的可以自己定义啊！那样就变得简单多了呢！呵呵。。非常感谢您！ 2012-04-05 22:00:43
zxc6884回答的很完整了。实际上关于酶活定义的问题，如果不是常见已有商品化的酶，已完全可以根据自己方便下一个定义。比如分光光度法测一些酶活，只要保证测试条件底物用量等一定，完全可以用单位时间单位蛋白造成的吸光度变化来做酶活单位。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
8楼2012-04-05 21:27:11
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shiliu2011

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zxc6884 at 2012-04-05 20:58:22:
有个别字打错了，不好意思。

还有一点不明白
U/mg=Δc/c，c=反应体系中的蛋白浓度（注意是反应体系）
比如，我的初始蛋白浓度1ug/ul 体系里是稀释10倍的蛋白液加了100微升，总反应体系是500微升，那么c=反应体系中的蛋白浓度（注意是反应体系）怎么计算？有点糊涂了。。。
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9楼2012-04-05 21:58:14
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shiliu2011

木虫 (正式写手)
10楼2012-04-06 10:02:00
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