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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 真菌菌丝超声破碎条件
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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 真菌菌丝超声破碎条件

要测真菌胞内酶活，想用超声破碎，菌体湿重3g左右，不知道什么超声条件合适？超声破碎真菌一般用什么条件？没用过超声，对此没什么概念，望用过的指导一下，谢谢！
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1楼 2011-06-23 19:48:31
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QIN0718

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

amq7392(金币+4): 谢谢 2011-06-24 08:26:49
Sample Text真菌胞内酶活,用不影响酶活性适当缓冲液浸泡菌体放在小烧杯中，然后用一个大烧杯装入冰块，加冷水后泡住有菌体的小烧杯进行超声处理，超声探头伸入菌体液中处理，一般超声处理30秒，停1分钟降温，超声处理温度高，条件要自己摸索，关键是低温保证酶活
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2楼2011-06-23 23:01:11
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QIN0718

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

amq7392(金币+1): 谢谢！ 2011-06-24 08:27:03
处理好后，低速低温离心，分离菌体和粗酶液，就可以了
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3楼2011-06-23 23:02:44
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zhouhuan0716

新虫 (初入文坛)
我目前也在做真菌菌丝体胞内酶的提取用于酶活的测定，50ml 菌体有3g，为了配合我们这里的超声破碎装置，我只取5ml-10ml，湿重500mg左右加5ml缓冲液破碎，破碎条件工作2s，停5s ，循环99次（破碎整个过程温度控制比较好，未产生很热的现象）      离心条件13000rpm/min  5min 4度，制得的粗酶液分装后直接放在4度冰箱以便后续实验。。。请前辈们指点一下，我的提取条件和保存方式是否合理可行？
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4楼2011-06-24 12:11:56
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zhouhuan0716

新虫 (初入文坛)
楼上的前辈，有个问题不懂，低温是怕酶高温失活，那为什么要低速离心呢？这个低速到底要低到什么程度呢？能否具体给个离心速度的范围？
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5楼2011-06-24 12:14:43
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QIN0718

至尊木虫 (职业作家)
酶是大分子物质，离心太快，剪切力大，有可能破坏酶的高级结构，影响酶的构象，影响酶活和其他酶学性质
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6楼2011-06-25 00:06:18
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长鑫

木虫 (正式写手)
请问有人明白静息细胞的培养实验么？呵呵，非常感谢楼主把真菌酶活的问题提出来，我最近正准备做做预实验看看呢，呵呵，没想到大家就提出来了，感谢感谢啊！

有个问题想问问大家，进行菌种活化后，是进行种子培养液的培养，然后你们获得的是菌丝球作为破碎的前提么？
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7楼2011-06-25 14:09:02
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swqowen

金虫 (职业作家)

勋章归天
先直接超声原酶液然后在稀释，还是先稀释后在超声酶液
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8楼2011-06-27 15:13:24
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jiyannangxj

至尊木虫 (著名写手)

美女搞科研
zhang8826857(金币+3): 鼓励交流，mm很pl啊 2012-02-26 18:22:58
超声破碎的一般条件：功率300w，20分钟。
超声前菌体预处理：菌液离心，用PBS洗涤2-3遍，然后按原菌液体积的1/5-1/10加入裂解液。裂解液成分：50mMTris-HCl，pH8.0.0.2mMEDTA，100mMNaCl，加溶菌酶100ug/ml，0.1%Triton X-100。
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9楼2012-02-26 17:48:28
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