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amq7392

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 真菌菌丝超声破碎条件

要测真菌胞内酶活,想用超声破碎,菌体湿重3g左右,不知道什么超声条件合适?超声破碎真菌一般用什么条件?没用过超声,对此没什么概念,望用过的指导一下,谢谢!
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QIN0718

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

amq7392(金币+4): 谢谢 2011-06-24 08:26:49
Sample Text真菌胞内酶活,用不影响酶活性适当缓冲液浸泡菌体放在小烧杯中,然后用一个大烧杯装入冰块,加冷水后泡住有菌体的小烧杯进行超声处理,超声探头伸入菌体液中处理,一般超声处理30秒,停1分钟降温,超声处理温度高,条件要自己摸索,关键是低温保证酶活
2楼2011-06-23 23:01:11
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QIN0718

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

amq7392(金币+1): 谢谢! 2011-06-24 08:27:03
处理好后,低速低温离心,分离菌体和粗酶液,就可以了
3楼2011-06-23 23:02:44
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zhouhuan0716

新虫 (初入文坛)

我目前也在做真菌菌丝体胞内酶的提取用于酶活的测定,50ml 菌体有3g,为了配合我们这里的超声破碎装置,我只取5ml-10ml,湿重500mg左右加5ml缓冲液破碎,破碎条件工作2s,停5s ,循环99次(破碎整个过程温度控制比较好,未产生很热的现象)      离心条件13000rpm/min  5min 4度,制得的粗酶液分装后直接放在4度冰箱以便后续实验。。。请前辈们指点一下,我的提取条件和保存方式是否合理可行?
4楼2011-06-24 12:11:56
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zhouhuan0716

新虫 (初入文坛)

楼上的前辈,有个问题不懂,低温是怕酶高温失活,那为什么要低速离心呢?这个低速到底要低到什么程度呢?能否具体给个离心速度的范围?
5楼2011-06-24 12:14:43
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QIN0718

至尊木虫 (职业作家)

酶是大分子物质,离心太快,剪切力大,有可能破坏酶的高级结构,影响酶的构象,影响酶活和其他酶学性质
6楼2011-06-25 00:06:18
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长鑫

木虫 (正式写手)

请问有人明白静息细胞的培养实验么?呵呵,非常感谢楼主把真菌酶活的问题提出来,我最近正准备做做预实验看看呢,呵呵,没想到大家就提出来了,感谢感谢啊!

有个问题想问问大家,进行菌种活化后,是进行种子培养液的培养,然后你们获得的是菌丝球作为破碎的前提么?
7楼2011-06-25 14:09:02
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swqowen

金虫 (职业作家)

勋章归天

先直接超声原酶液然后在稀释,还是先稀释后在超声酶液
8楼2011-06-27 15:13:24
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jiyannangxj

至尊木虫 (著名写手)

美女搞科研

zhang8826857(金币+3): 鼓励交流,mm很pl啊 2012-02-26 18:22:58
超声破碎的一般条件:功率300w,20分钟。
超声前菌体预处理:菌液离心,用PBS洗涤2-3遍,然后按原菌液体积的1/5-1/10加入裂解液。裂解液成分:50mMTris-HCl,pH8.0.0.2mMEDTA,100mMNaCl,加溶菌酶100ug/ml,0.1%Triton X-100。
9楼2012-02-26 17:48:28
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