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fanger

银虫 (小有名气)

[求助] 求助用超声波破碎细胞

用超声波破碎细胞为何会产生白色沉淀，那是细胞团吗？要超声多久才会使得这种现象消失，溶液变澄清？
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做好自己！
1楼 2011-07-26 09:10:31
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海绵控

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): 鼓励新虫交流 2011-07-26 11:02:19
fanger(金币+1): 2011-07-26 19:02:08
我破碎过植物根（茉莉根），干品，用的条件最高一个是600W，一般超声时间超过好像是半个小时细胞就会有被破坏的可能，我摸索过的条件是从十分钟开始到两个半小时，效果最好的是半个小时，
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2楼2011-07-26 10:48:43
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101202139

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
fanger(金币+1): 2011-07-26 19:02:18
dhd997(金币+2): 鼓励经验交流 2011-07-26 20:51:58
我做的几种蛋白，有的用超生破碎的方法，效果挺好，但是有的就不怎么样，我就通过高压破碎的方法，效果还可以，至少比超生破碎的好。你可以尝试一下……
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3楼2011-07-26 14:39:49
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nicole1124

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
fanger(金币+1): 2011-07-26 19:02:26
fanger(金币+1): 这个我都很清楚，我搞的是肿瘤细胞或动物细胞，白色沉淀是如何产生的？不是用生理盐水收集细胞再超声的吗？各位大侠，求详解，关键的，急！实验迫在眉睫！ 2011-07-26 19:08:17
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-07-26 20:52:09
是超什么细胞？大肠杆菌还是293T之类的细胞？超声的时间和样品的多少和体积有关，一般来说，如果是纯化蛋白超声大肠杆菌，800ML培养基收集的菌，我用的是400-600W，超三秒，停15秒一个循环，超半个小时左右，记得一定要加蛋白酶抑制剂，冰水浴。 如果是细胞，一个10cm的培养皿收集下来的细胞，用200W，超两秒，停10秒，只用超10个循环左右就足够了，蛋白酶抑制剂可加可不加，因为加了会改变样品组成，而且如果一直保持在冰上操作，基本不会有什么降解。

你的样品是超声之后才出现白色沉淀的吗？很有可能是蛋白变性后形成的聚集体，超声过程要注意冰水浴，工作时间尽量短，间隔时间长，让样品有足够的时间冷却，超声的产热是很厉害的。
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4楼2011-07-26 16:51:41
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

fanger(金币+1): 超声的是动物细胞或肿瘤细胞，非细菌！！如何解决这种情况！！ 2011-07-26 19:06:22
引用回帖:
Originally posted by fanger at 2011-07-26 09:10:31:
用超声波破碎细胞为何会产生白色沉淀，那是细胞团吗？要超声多久才会使得这种现象消失，溶液变澄清？

白色沉淀是不是蛋白沉了啊，BUFFER离子浓度会不会太低，超声方法楼上就好
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loveskyzhou
我会绕一个圈，走回到实验室
5楼2011-07-26 18:29:06
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
Originally posted by loveskyzhou at 2011-07-26 18:29:06:
白色沉淀是不是蛋白沉了啊，BUFFER离子浓度会不会太低，超声方法楼上就好

哦。。。。这方面不熟悉不敢瞎说，同求解
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我会绕一个圈，走回到实验室
6楼2011-07-26 19:15:58
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a198469327

新虫 (初入文坛)
请问楼主是产生絮状沉淀还是普通的菌体白色沉淀
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7楼2013-01-30 09:06:28
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mxy19920412

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by nicole1124 at 2011-07-26 16:51:41
是超什么细胞？大肠杆菌还是293T之类的细胞？超声的时间和样品的多少和体积有关，一般来说，如果是纯化蛋白超声大肠杆菌，800ML培养基收集的菌，我用的是400-600W，超三秒，停15秒一个循环，超半个小时左右，记得一 ...

请问破细胞的话探头必须要用2mm的吗？我们的探头比较大可不可以啊？
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8楼2016-09-23 16:54:46
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