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fanger

银虫 (小有名气)

[求助] 求助用超声波破碎细胞

用超声波破碎细胞为何会产生白色沉淀,那是细胞团吗?要超声多久才会使得这种现象消失,溶液变澄清?
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海绵控

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): 鼓励新虫交流 2011-07-26 11:02:19
fanger(金币+1): 2011-07-26 19:02:08
我破碎过植物根(茉莉根),干品,用的条件最高一个是600W,一般超声时间超过好像是半个小时细胞就会有被破坏的可能,我摸索过的条件是从十分钟开始到两个半小时,效果最好的是半个小时,
2楼2011-07-26 10:48:43
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101202139

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
fanger(金币+1): 2011-07-26 19:02:18
dhd997(金币+2): 鼓励经验交流 2011-07-26 20:51:58
我做的几种蛋白,有的用超生破碎的方法,效果挺好,但是有的就不怎么样,我就通过高压破碎的方法,效果还可以,至少比超生破碎的好。你可以尝试一下……
3楼2011-07-26 14:39:49
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nicole1124

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
fanger(金币+1): 2011-07-26 19:02:26
fanger(金币+1): 这个我都很清楚,我搞的是肿瘤细胞或动物细胞,白色沉淀是如何产生的?不是用生理盐水收集细胞再超声的吗?各位大侠,求详解,关键的,急!实验迫在眉睫! 2011-07-26 19:08:17
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-07-26 20:52:09
是超什么细胞?大肠杆菌还是293T之类的细胞?超声的时间和样品的多少和体积有关,一般来说,如果是纯化蛋白超声大肠杆菌,800ML培养基收集的菌,我用的是400-600W,超三秒,停15秒一个循环,超半个小时左右,记得一定要加蛋白酶抑制剂,冰水浴。 如果是细胞,一个10cm的培养皿收集下来的细胞,用200W,超两秒,停10秒,只用超10个循环左右就足够了,蛋白酶抑制剂可加可不加,因为加了会改变样品组成,而且如果一直保持在冰上操作,基本不会有什么降解。

你的样品是超声之后才出现白色沉淀的吗?很有可能是蛋白变性后形成的聚集体,超声过程要注意冰水浴,工作时间尽量短,间隔时间长,让样品有足够的时间冷却,超声的产热是很厉害的。
4楼2011-07-26 16:51:41
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

fanger(金币+1): 超声的是动物细胞或肿瘤细胞,非细菌!!如何解决这种情况!! 2011-07-26 19:06:22
引用回帖:
Originally posted by fanger at 2011-07-26 09:10:31:
用超声波破碎细胞为何会产生白色沉淀,那是细胞团吗?要超声多久才会使得这种现象消失,溶液变澄清?

白色沉淀是不是蛋白沉了啊,BUFFER离子浓度会不会太低,超声方法楼上就好

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我会绕一个圈,走回到实验室
5楼2011-07-26 18:29:06
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
Originally posted by loveskyzhou at 2011-07-26 18:29:06:
白色沉淀是不是蛋白沉了啊,BUFFER离子浓度会不会太低,超声方法楼上就好

哦。。。。这方面不熟悉不敢瞎说,同求解
我会绕一个圈,走回到实验室
6楼2011-07-26 19:15:58
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a198469327

新虫 (初入文坛)

请问楼主是产生絮状沉淀还是普通的菌体白色沉淀
7楼2013-01-30 09:06:28
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mxy19920412

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by nicole1124 at 2011-07-26 16:51:41
是超什么细胞?大肠杆菌还是293T之类的细胞?超声的时间和样品的多少和体积有关,一般来说,如果是纯化蛋白超声大肠杆菌,800ML培养基收集的菌,我用的是400-600W,超三秒,停15秒一个循环,超半个小时左右,记得一 ...

请问破细胞的话探头必须要用2mm的吗?我们的探头比较大可不可以啊?
8楼2016-09-23 16:54:46
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