| 查看: 3849 | 回复: 11 | ||||
[求助]
目的基因连接到克隆载体后提取质粒测序，序列有问题
|
||||
| 虫友们帮帮忙，我以质粒为模板进行PCR，之后连接到T载体上，转化入大肠杆菌中，提取质粒，双酶切鉴定，但是几个菌落酶切后的目的基因片段大小有点差别，有750bp的，有700bp左右的，还有650bp左右的。我就将这三个都拿去测序，结果750bp的是我要的序列，但是另外两个稍微短一些的序列也是我的序列，只不过中间分别少了十几个和二十几个氨基酸，其它的氨基酸序列都与正确的序列是一样的。怎么会发生这种情况呢？难道在大肠杆菌中发生剪接了，剪掉了一些氨基酸？有虫友碰到过这种情况吗？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 | 重复序列PCR扩增 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有194人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 哪位好心人给我讲讲DGGE后切胶回收、连接、转化、克隆到测序的过程？？
已经有7人回复
- 我做的基因克隆，平行的几个克隆测序后，片段比对重叠率怎么不是100%
已经有5人回复
- 我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的
已经有31人回复
- 线粒体基因控制区CR含重复序列，为什么PCR产物直接测序不准，而要纯化或者克隆再测序
已经有12人回复
- 转化真菌后，怎么鉴定转化子？目的基因是从该真菌克隆出来的
已经有5人回复
- 已经克隆测序到了matK序列，如何界定？急切求助中，谢谢！
已经有10人回复
- 我将1质粒连在BK载体上，但是阳性克隆鉴定一直是阴性，什么原因呢
已经有6人回复
- pMD18-T载体与目的基因连接后构建的质粒能通过接合转移到一些难以转化的细菌中吗？
已经有8人回复
- 从 单克隆杂交瘤细胞 到 抗体序列（抗体测序）
已经有24人回复
- pcr产物测序和克隆之后重组质粒测序结果一样吗？
已经有12人回复
- 克隆基因连接到载体上测序发现有一个点突变怎么办？
已经有16人回复
- 克隆基因和载体连接后转化至大肠杆菌，为什么每次涂板都是空平板没有菌落？
已经有17人回复
- 【求助/交流】枯草-大肠穿梭质粒pHY300PLK是克隆载体还是表达载体？
已经有3人回复
- 【求助/交流】质粒测序测不到克隆位点
已经有16人回复
- 【求助/交流】分类鉴定的时候，为什么pcr之后还要做TA克隆，转化，然后将序列测序呢？
已经有5人回复
- 【求助/交流】质粒跟目的基因连接不上怎么办
已经有17人回复
- 【求助/交流】目的基因克隆总不成功
已经有5人回复
- 【求助/交流】只知道基因功能，但不知序列位置，怎样克隆目的基因
已经有8人回复
- 【求助/交流】关于目的基因的克隆
已经有12人回复
9楼2012-12-21 21:39:54
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
首先，指出你描述问题的错误的地方， “只不过中间分别少了十几个和二十几个氨基酸，其它的氨基酸序列都与正确的序列是一样的。”这里不是氨基酸序列，你描述的应该是核苷酸序列 “难道在大肠杆菌中发生剪接了，剪掉了一些氨基酸？”这里同样应是核苷酸序列。 “有750bp的，有700bp左右的，还有650bp左右的”，“结果750bp的是我要的序列，但是另外两个稍微短一些的序列也是我的序列，只不过中间分别少了十几个和二十几个氨基酸，其它的氨基酸序列都与正确的序列是一样的。” 据你描述这三个质粒应该都是你的引物扩增出来的，但有两个出现了两个质粒中间缺少一段序列的情况，我觉得你的序列中可能存在重复序列，然后PCR后，会少一个重复，你分析下你的序列，看看是不是我说的这种情况，也就是找下你的序列中有没有一段是重复序列。 |
2楼2012-12-19 23:25:09
3楼2012-12-20 05:59:59
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
4楼2012-12-20 09:22:13
5楼2012-12-20 20:20:05
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
6楼2012-12-21 07:43:29
 |
7楼2012-12-21 08:31:20
platanus
木虫 (著名写手)
- 应助: 36 (小学生)
- 金币: 4570.3
- 散金: 113
- 红花: 2
- 帖子: 1261
- 在线: 152小时
- 虫号: 439482
- 注册: 2007-10-13
- 性别: GG
- 专业: 观赏园艺学
8楼2012-12-21 11:59:32
10楼2012-12-21 21:41:18
