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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的
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fengyunqb

新虫 (小有名气)

[求助] 我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的

我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的条带就可以了吧？因为我的胶回收目的片段比较单一且比较亮。但老师说要蓝白斑筛选重组子。IPTG和X-gal.因为我没配过这东西。看能不能省掉呢？谢谢解答。
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1楼 2012-09-11 11:17:25
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elbo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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fengyunqb: 金币+1 2012-09-12 09:37:15
肯定不能省  个人认为
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2楼2012-09-11 11:24:09
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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fengyunqb: 金币+1 2012-09-12 09:38:45
如果要做菌落PCR检测就可以不用蓝白斑筛选，PCR出来有目的条带就可以测序了。如果使用蓝白斑筛选，就可省略菌落PCR这一步。
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3楼2012-09-11 12:13:25
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mduaerp

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个肯定不能省，测序的话要挑阳性单克隆，不然测序结果会不准确，甚至无法测序
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想的太多，做的太少
4楼2012-09-11 12:16:48
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asdkingstar

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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蓝白班选，然后菌落pcr和后面的双酶切基本上都不能省，你要知道每个步骤的原因，如果真需要省的话，双酶切是可以省的，前提是总量比较少。
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爱是浅浅的喜欢，喜欢是浅浅的爱。
5楼2012-09-11 12:52:47
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yananhl

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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fengyunqb: 金币+1 2012-09-12 09:39:09
要用蓝白斑筛选啊，我们有小师妹不用试过的，但是阳性克隆结果不好，无法达到要求去测序。
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6楼2012-09-11 15:50:11
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here0009

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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fengyunqb: 金币+1 2012-09-12 09:39:36
可以省吧，蓝白斑很多假阳性，菌液pcr p的片段长一点，假阳性还是不多的
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Forthemoon
7楼2012-09-11 16:04:25
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

★
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fengyunqb: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-09-12 09:40:22
最好不要省，做完全的话就是蓝白斑筛选，之后菌液PCR和酶切验证，两个结果一致了就测序。既然你PCR都做了，那就做个酶切验证吧，大小正确基本可以测序！
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持之以恒、永不放弃！
8楼2012-09-11 16:57:57
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xw19880905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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这个不能省呀，你做这个就是检测你是否转化成功，然后才拿去测序呀
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9楼2012-09-11 17:23:47
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hch123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
fengyunqb: 金币+1 2012-09-12 09:40:55
我一直都不用蓝白斑的，含氨苄的培养基培养，挑菌PCR有结果接好啊！
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脚踏实地：遇一个，学一个，会一个。。。
10楼2012-09-11 21:08:27
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