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fengyunqb

新虫 (小有名气)

[求助] 我做TA克隆,准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的

我做TA克隆,准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的条带就可以了吧?因为我的胶回收目的片段比较单一且比较亮。但老师说要蓝白斑筛选重组子。IPTG和X-gal.因为我没配过这东西。看能不能省掉呢?谢谢解答。
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elbo

金虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
fengyunqb: 金币+1 2012-09-12 09:37:15
肯定不能省  个人认为
2楼2012-09-11 11:24:09
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
fengyunqb: 金币+1 2012-09-12 09:38:45
如果要做菌落PCR检测就可以不用蓝白斑筛选,PCR出来有目的条带就可以测序了。如果使用蓝白斑筛选,就可省略菌落PCR这一步。
3楼2012-09-11 12:13:25
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mduaerp

金虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
这个肯定不能省,测序的话要挑阳性单克隆,不然测序结果会不准确,甚至无法测序
想的太多,做的太少
4楼2012-09-11 12:16:48
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asdkingstar

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
蓝白班选,然后菌落pcr和后面的双酶切基本上都不能省,你要知道每个步骤的原因,如果真需要省的话,双酶切是可以省的,前提是总量比较少。
爱是浅浅的喜欢,喜欢是浅浅的爱。
5楼2012-09-11 12:52:47
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yananhl

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
fengyunqb: 金币+1 2012-09-12 09:39:09
要用蓝白斑筛选啊,我们有小师妹不用试过的,但是阳性克隆结果不好,无法达到要求去测序。
6楼2012-09-11 15:50:11
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here0009

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
fengyunqb: 金币+1 2012-09-12 09:39:36
可以省吧,蓝白斑很多假阳性,菌液pcr p的片段长一点,假阳性还是不多的
Forthemoon
7楼2012-09-11 16:04:25
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

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fengyunqb: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-09-12 09:40:22
最好不要省,做完全的话就是蓝白斑筛选,之后菌液PCR和酶切验证,两个结果一致了就测序。既然你PCR都做了,那就做个酶切验证吧,大小正确基本可以测序!
持之以恒、永不放弃!
8楼2012-09-11 16:57:57
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xw19880905

新虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
这个不能省呀,你做这个就是检测你是否转化成功,然后才拿去测序呀
9楼2012-09-11 17:23:47
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hch123

金虫 (正式写手)

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感谢参与,应助指数 +1
fengyunqb: 金币+1 2012-09-12 09:40:55
我一直都不用蓝白斑的,含氨苄的培养基培养,挑菌PCR有结果接好啊!
脚踏实地:遇一个,学一个,会一个。。。
10楼2012-09-11 21:08:27
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