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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的
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tanglian8655

金虫 (正式写手)
这个是不能省略的，否则结果不准确
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21楼2012-09-12 10:10:49
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sd3824289

木虫 (正式写手)
保险一点，除了做菌落PCR鉴定外，最好提取质粒，做个酶切鉴定（前提是目的片段有酶切位点）因为菌落PCR的阳性率比较高！
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坚持，就像流星，即使知道最后的结果，也要勇敢的走到最后！
22楼2012-09-13 09:05:24
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yiyi12

银虫 (小有名气)
可以省啊。我们一直都是用amp培养基筛选后挑菌培养菌液PCR，直接测序的。
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23楼2012-09-13 22:06:23
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愤怒的小笨鸟

木虫 (正式写手)
我也不用蓝白斑筛选，直接涂氨苄平板，再挑克隆，做菌体PCR
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24楼2012-10-31 16:36:50
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hyx312312

铁虫 (初入文坛)
我们实验室都不做蓝白斑的，每次也是PCR检菌，然后拿去测序，也都得到了序列。
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学无止境
25楼2012-12-19 22:10:56
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科
我不用蓝白斑筛选好多年了，实验一直挺好的，T载体用过promega的，天跟的，宝生物的。本人的实验证明宝生物的T载体最可靠，长出的转化子基本是阳性克隆。一般不需再用IPTG和X-gal。
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转向地质微生物学
26楼2012-12-19 22:35:01
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fengyunqb
引用回帖:
26楼: Originally posted by liujianmin68 at 2012-12-19 22:35:01
我不用蓝白斑筛选好多年了，实验一直挺好的，T载体用过promega的，天跟的，宝生物的。本人的实验证明宝生物的T载体最可靠，长出的转化子基本是阳性克隆。一般不需再用IPTG和X-gal。

27楼2012-12-20 10:40:03
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Renavatio

木虫 (小有名气)
蓝白筛选还是最好不要少，可以减少菌落PCR的工作量，尤其是阳性率不高的时候。我就试过一次，挑了十几个克隆才有一个阳性的！个人觉得一般的话菌落PCR可以省，不过对于送去测序之前，最好做一下酶切检测
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Undefined！
28楼2012-12-21 00:58:28
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thaw

铜虫 (小有名气)
我已经很久没有用蓝白筛选了，1、现在的T载体效率很高，挑4个怎么着也有正确的了2、IPTG对细胞有一定的损坏。我建议，不用X-gal IPTG，直接涂，然后挑几个作菌液PCR，但是一定要用载体上的引物，比如M13R/F，能扩增出比你的目的片段稍大的条带的克隆就是正确的。一般大200bp左右
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29楼2012-12-21 09:06:29
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mguo15

银虫 (小有名气)
做其它的鉴定，你需要一天以上时间。测序可以省这个时间。每个菌测序只要二十几块钱，从经济上来说，多送几个菌就够了。不过看你导师的意愿吧！
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30楼2012-12-21 11:07:23
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