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tanglian8655

金虫 (正式写手)

这个是不能省略的,否则结果不准确
21楼2012-09-12 10:10:49
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sd3824289

木虫 (正式写手)

保险一点,除了做菌落PCR鉴定外,最好提取质粒,做个酶切鉴定(前提是目的片段有酶切位点)因为菌落PCR的阳性率比较高!
坚持,就像流星,即使知道最后的结果,也要勇敢的走到最后!
22楼2012-09-13 09:05:24
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yiyi12

银虫 (小有名气)

可以省啊。我们一直都是用amp培养基筛选后挑菌培养菌液PCR,直接测序的。
23楼2012-09-13 22:06:23
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愤怒的小笨鸟

木虫 (正式写手)

我也不用蓝白斑筛选,直接涂氨苄平板,再挑克隆,做菌体PCR
24楼2012-10-31 16:36:50
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hyx312312

铁虫 (初入文坛)

我们实验室都不做蓝白斑的,每次也是PCR检菌,然后拿去测序,也都得到了序列。
学无止境
25楼2012-12-19 22:10:56
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

我不用蓝白斑筛选好多年了,实验一直挺好的,T载体用过promega的,天跟的,宝生物的。本人的实验证明宝生物的T载体最可靠,长出的转化子基本是阳性克隆。一般不需再用IPTG和X-gal。
转向地质微生物学
26楼2012-12-19 22:35:01
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引用回帖:
26楼: Originally posted by liujianmin68 at 2012-12-19 22:35:01
我不用蓝白斑筛选好多年了,实验一直挺好的,T载体用过promega的,天跟的,宝生物的。本人的实验证明宝生物的T载体最可靠,长出的转化子基本是阳性克隆。一般不需再用IPTG和X-gal。

27楼2012-12-20 10:40:03
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Renavatio

木虫 (小有名气)

蓝白筛选还是最好不要少,可以减少菌落PCR的工作量,尤其是阳性率不高的时候。我就试过一次,挑了十几个克隆才有一个阳性的!个人觉得一般的话菌落PCR可以省,不过对于送去测序之前,最好做一下酶切检测
Undefined!
28楼2012-12-21 00:58:28
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thaw

铜虫 (小有名气)

我已经很久没有用蓝白筛选了,1、现在的T载体效率很高,挑4个怎么着也有正确的了2、IPTG对细胞有一定的损坏。我建议,不用X-gal IPTG,直接涂,然后挑几个作菌液PCR,但是一定要用载体上的引物,比如M13R/F,能扩增出比你的目的片段稍大的条带的克隆就是正确的。一般大200bp左右
29楼2012-12-21 09:06:29
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mguo15

银虫 (小有名气)

做其它的鉴定,你需要一天以上时间。测序可以省这个时间。每个菌测序只要二十几块钱,从经济上来说,多送几个菌就够了。不过看你导师的意愿吧!
30楼2012-12-21 11:07:23
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