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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的
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fengyunqb

新虫 (小有名气)

[求助] 我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的

我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的条带就可以了吧？因为我的胶回收目的片段比较单一且比较亮。但老师说要蓝白斑筛选重组子。IPTG和X-gal.因为我没配过这东西。看能不能省掉呢？谢谢解答。
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1楼 2012-09-11 11:17:25
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thaw

铜虫 (小有名气)
我已经很久没有用蓝白筛选了，1、现在的T载体效率很高，挑4个怎么着也有正确的了2、IPTG对细胞有一定的损坏。我建议，不用X-gal IPTG，直接涂，然后挑几个作菌液PCR，但是一定要用载体上的引物，比如M13R/F，能扩增出比你的目的片段稍大的条带的克隆就是正确的。一般大200bp左右
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29楼2012-12-21 09:06:29
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elbo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
fengyunqb: 金币+1 2012-09-12 09:37:15
肯定不能省  个人认为
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2楼2012-09-11 11:24:09
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
fengyunqb: 金币+1 2012-09-12 09:38:45
如果要做菌落PCR检测就可以不用蓝白斑筛选，PCR出来有目的条带就可以测序了。如果使用蓝白斑筛选，就可省略菌落PCR这一步。
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3楼2012-09-11 12:13:25
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mduaerp

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个肯定不能省，测序的话要挑阳性单克隆，不然测序结果会不准确，甚至无法测序
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想的太多，做的太少
4楼2012-09-11 12:16:48
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