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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的
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hlwnxfd2011

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
fengyunqb: 金币+1 2012-09-12 09:42:29
我们这只加氨苄筛菌，也不做菌落PCR验证，实验结果也还理想。
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11楼2012-09-11 21:18:51
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liuxiuaza

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果要做蓝白斑筛选，这两个是不能省的！
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12楼2012-09-12 08:36:27
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
fengyunqb: 金币+1 2012-09-12 09:42:37
这个肯定是不能省的，你送去测序的是挑的阳性单菌落，挑菌过后再做菌液PCR，确定为阳性克隆过后才能送测，这样才能保证测序结果。你直接转化的里面有阳性的、空载、PCR原片段，这样是保证不了你的测序结果的。
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低调稳重务实内敛---------------残
13楼2012-09-12 08:49:57
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fengyunqb

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by elbo at 2012-09-11 11:24:09
肯定不能省  个人认为

谢谢。
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14楼2012-09-12 09:37:24
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fengyunqb

新虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by aofeng860308 at 2012-09-11 12:13:25
如果要做菌落PCR检测就可以不用蓝白斑筛选，PCR出来有目的条带就可以测序了。如果使用蓝白斑筛选，就可省略菌落PCR这一步。

谢谢指点。
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15楼2012-09-12 09:38:59
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fengyunqb

新虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by yananhl at 2012-09-11 15:50:11
要用蓝白斑筛选啊，我们有小师妹不用试过的，但是阳性克隆结果不好，无法达到要求去测序。

谢谢建议。
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16楼2012-09-12 09:39:19
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fengyunqb

新虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by here0009 at 2012-09-11 16:04:25
可以省吧，蓝白斑很多假阳性，菌液pcr p的片段长一点，假阳性还是不多的

谢谢建议，到时候两者结合看看吧。
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17楼2012-09-12 09:39:55
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fengyunqb

新虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-09-11 16:57:57
最好不要省，做完全的话就是蓝白斑筛选，之后菌液PCR和酶切验证，两个结果一致了就测序。既然你PCR都做了，那就做个酶切验证吧，大小正确基本可以测序！

谢谢指点。很有帮助。
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18楼2012-09-12 09:40:35
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fengyunqb

新虫 (小有名气)
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10楼: Originally posted by hch123 at 2012-09-11 21:08:27
我一直都不用蓝白斑的，含氨苄的培养基培养，挑菌PCR有结果接好啊！

直接在氨苄板子上面再涂点IPTG和Xgal就可以。一样的。一般要弄几块对照版呢？
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19楼2012-09-12 09:42:13
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fengyunqb

新虫 (小有名气)
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11楼: Originally posted by hlwnxfd2011 at 2012-09-11 21:18:51
我们这只加氨苄筛菌，也不做菌落PCR验证，实验结果也还理想。

谢谢。
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20楼2012-09-12 09:42:51
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