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hlwnxfd2011

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
fengyunqb: 金币+1 2012-09-12 09:42:29
我们这只加氨苄筛菌,也不做菌落PCR验证,实验结果也还理想。
11楼2012-09-11 21:18:51
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liuxiuaza

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果要做蓝白斑筛选,这两个是不能省的!
12楼2012-09-12 08:36:27
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
fengyunqb: 金币+1 2012-09-12 09:42:37
这个肯定是不能省的,你送去测序的是挑的阳性单菌落,挑菌过后再做菌液PCR,确定为阳性克隆过后才能送测,这样才能保证测序结果。你直接转化的里面有阳性的、空载、PCR原片段,这样是保证不了你的测序结果的。
低调稳重务实内敛---------------残
13楼2012-09-12 08:49:57
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fengyunqb

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by elbo at 2012-09-11 11:24:09
肯定不能省  个人认为

谢谢。
14楼2012-09-12 09:37:24
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fengyunqb

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by aofeng860308 at 2012-09-11 12:13:25
如果要做菌落PCR检测就可以不用蓝白斑筛选,PCR出来有目的条带就可以测序了。如果使用蓝白斑筛选,就可省略菌落PCR这一步。

谢谢指点。
15楼2012-09-12 09:38:59
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fengyunqb

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by yananhl at 2012-09-11 15:50:11
要用蓝白斑筛选啊,我们有小师妹不用试过的,但是阳性克隆结果不好,无法达到要求去测序。

谢谢建议。
16楼2012-09-12 09:39:19
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fengyunqb

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by here0009 at 2012-09-11 16:04:25
可以省吧,蓝白斑很多假阳性,菌液pcr p的片段长一点,假阳性还是不多的

谢谢建议,到时候两者结合看看吧。
17楼2012-09-12 09:39:55
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fengyunqb

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-09-11 16:57:57
最好不要省,做完全的话就是蓝白斑筛选,之后菌液PCR和酶切验证,两个结果一致了就测序。既然你PCR都做了,那就做个酶切验证吧,大小正确基本可以测序!

谢谢指点。很有帮助。
18楼2012-09-12 09:40:35
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fengyunqb

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by hch123 at 2012-09-11 21:08:27
我一直都不用蓝白斑的,含氨苄的培养基培养,挑菌PCR有结果接好啊!

直接在氨苄板子上面再涂点IPTG和Xgal就可以。一样的。一般要弄几块对照版呢?
19楼2012-09-12 09:42:13
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fengyunqb

新虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by hlwnxfd2011 at 2012-09-11 21:18:51
我们这只加氨苄筛菌,也不做菌落PCR验证,实验结果也还理想。

谢谢。
20楼2012-09-12 09:42:51
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