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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的
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fengyunqb

新虫 (小有名气)

[求助] 我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的

我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的条带就可以了吧？因为我的胶回收目的片段比较单一且比较亮。但老师说要蓝白斑筛选重组子。IPTG和X-gal.因为我没配过这东西。看能不能省掉呢？谢谢解答。
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1楼 2012-09-11 11:17:25
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)

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★
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fengyunqb: 金币+1 2012-09-12 09:42:37
这个肯定是不能省的，你送去测序的是挑的阳性单菌落，挑菌过后再做菌液PCR，确定为阳性克隆过后才能送测，这样才能保证测序结果。你直接转化的里面有阳性的、空载、PCR原片段，这样是保证不了你的测序结果的。
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低调稳重务实内敛---------------残
13楼2012-09-12 08:49:57
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elbo

金虫 (小有名气)

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fengyunqb: 金币+1 2012-09-12 09:37:15
肯定不能省  个人认为
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2楼2012-09-11 11:24:09
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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fengyunqb: 金币+1 2012-09-12 09:38:45
如果要做菌落PCR检测就可以不用蓝白斑筛选，PCR出来有目的条带就可以测序了。如果使用蓝白斑筛选，就可省略菌落PCR这一步。
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3楼2012-09-11 12:13:25
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mduaerp

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个肯定不能省，测序的话要挑阳性单克隆，不然测序结果会不准确，甚至无法测序
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想的太多，做的太少
4楼2012-09-11 12:16:48
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