[交流] 【求助/交流】分类鉴定的时候，为什么pcr之后还要做TA克隆，转化，然后将序列测序呢？

在做菌株分类鉴定的时候，为什么对菌株提了DNA，pcr之后还进行TA克隆，转化，然后将阳性克隆进行PCR之后再去测序呢？这样的好处是什么呢？希望大家知道的多多指教啊，非常感谢啊！！！！！

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1楼 2011-03-16 14:54:43

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roomofxw

木虫 (正式写手)

kaludefeiyu(金币+1): 说的清楚，明白了，谢谢 2011-03-17 09:14:22
kaludefeiyu(金币+1): 2011-03-17 09:17:38

为了测序准确：
1. PCR产物是混合物，所以要连在载体上，挑单克隆测序。
2.测序结果两端有几十bp是测不准的，所有连在载体上，用载体上的测序引物，可以把目的基因置于可信区。
3.实验结果方便保存

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2楼2011-03-16 15:03:37

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kaludefeiyu

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

Originally posted by roomofxw at 2011-03-16 15:03:37:
为了测序准确：
1. PCR产物是混合物，所以要连在载体上，挑单克隆测序。
2.测序结果两端有几十bp是测不准的，所有连在载体上，用载体上的测序引物，可以把目的基因置于可信区。
3.实验结果方便保存

想问一下，怎么就能确定连在载体上的就是我们所需要的那个片段呢啊，它只能连16SRDNA,不可以连上引物吗？还有我们一般选用什么样的载体啊，

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3楼2011-03-17 10:06:13

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roomofxw

木虫 (正式写手)

kaludefeiyu(金币+3): 谢谢 2011-06-01 15:15:08

引用回帖:

Originally posted by kaludefeiyu at 2011-03-17 10:06:13:
想问一下，怎么就能确定连在载体上的就是我们所需要的那个片段呢啊，它只能连16SRDNA,不可以连上引物吗？还有我们一般选用什么样的载体啊，

连到T载体上以后，蓝白斑筛选，阳性克隆提质粒做酶切鉴定或者菌落PCR，然后送测序。具体一点参见T vector说明书

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4楼2011-03-17 10:46:53

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chenxiang29

银虫 (正式写手)

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

682350楼: Originally posted by roomofxw at 2011-03-16 15:03:37
为了测序准确：
1. PCR产物是混合物，所以要连在载体上，挑单克隆测序。
2.测序结果两端有几十bp是测不准的，所有连在载体上，用载体上的测序引物，可以把目的基因置于可信区。
3.实验结果方便保存

请问不可以直接连接到表达质粒上吗，然后测序

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5楼2012-11-01 09:29:06

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