应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR法克隆基因
91/1返回列表
查看: 1460  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wangxueqin

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR法克隆基因 已有6人参与

请教一下各位大侠：
我现在要克隆一个基因，在水稻里面是长3000bp左右，没有内含子，可以设计引物先扩增出中间一段，然后根据已经序列，设计单引物，一直朝两头扩增，这样的思路可以么？是否可以扩增出来整个完整的基因。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-05-13 09:52:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一般可以先扩增保守序列，然后设计基因特异性引物，做RACE（建议），Tail-PCR,genome walking等等。你说的单引物恐怕是行不通的。。。
赞一下(1人) 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2010-05-13 10:04:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxueqin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-05-13 10:04:22:
一般可以先扩增保守序列，然后设计基因特异性引物，做RACE（建议），Tail-PCR,genome walking等等。你说的单引物恐怕是行不通的。。。

这个基因已经有人太这个种里面克隆过了，用RACE法行不通，说是GC含量太高了，就只扩增出了中间一小个片段，大概800bp左右的，可能结果不好分析，他们就没有把序列上传到NCBI上面，所以我现在也查不到序列。我们之前也考虑用RACE法，但我老板说直接拿DNA来扩了看看结果，再用单引物扩。

你说的tail pcr, genome walking适合GC含量高的序列么？
赞一下 回复此楼
3楼2010-05-13 15:39:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
你现在到底是知道序列还是不知道啊，说明白点，3000多是怎么知道的
赞一下 回复此楼
4楼2010-05-13 23:33:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
对啊，楼主的话语有些矛盾啊
赞一下(1人) 回复此楼
将有能量帮助他人作为自己的人生追求！
5楼2010-05-13 23:48:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxueqin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-05-13 23:33:36:
你现在到底是知道序列还是不知道啊，说明白点，3000多是怎么知道的

这个基因在水稻里面是3000多bp，单拷贝，没有内含子的。我是设计的简并引物，在竹子里面来扩这个基因，设计回来的引物，退火温度已经升到68度了，还是两条很整齐亮度一致的带，大小在800bp左右，两条带之间差了可能100个bp，郁闷啊，可能是引物 问题了？目前的考虑是割胶，不知道行不行得通。都不知道哪个是杂带，郁闷啊。

是有别人也在竹子里面扩过这个基因，但是他们的序列没有上传到NCBI上面，所以也查不着。
赞一下 回复此楼
6楼2010-05-14 13:47:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-14 21:12:37
同源克隆的话，建议你还是做一下RACE吧，测序后再扩全基因，不然的话扩增片段还可以，想拿到整个阅读框就比较困难了
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2010-05-14 19:28:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
水稻基因组不是已经完成了吗？既然没有内含子你可以直接根据DNA序列设计引物进行扩增啊
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-05-14 19:53:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

过氧化氢

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
3000多bp多长了点
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-05-14 22:52:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wangxueqin 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂院校信息 +4 CX 330 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:48 by ms629
[考研] 一志愿211，0703化学310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-21 22:21 by peike
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +3 zxts12 2026-03-21 3/150 2026-03-21 16:34 by 33来了真来了
[考研] 268求调剂 +9 简单点0 2026-03-17 9/450 2026-03-21 15:37 by lature00
[考研] 265求调剂 +3 Jack?k?y 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:17 by JourneyLucky
[考研] 301求调剂 +10 yy要上岸呀 2026-03-17 10/500 2026-03-21 03:14 by JourneyLucky
[考研] 303求调剂 +5 睿08 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:11 by JourneyLucky
[考研] 化学求调剂 +4 临泽境llllll 2026-03-17 5/250 2026-03-21 02:23 by JourneyLucky
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +12 墨墨漠 2026-03-18 13/650 2026-03-21 01:42 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +4 一志愿京区211 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:41 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭